橙皮素及柚皮素對UGTs活性影響及其臨床藥物相互作用風(fēng)險預(yù)測.pdf

1、背景：
　　橙皮素、柚皮素分別為黃烷酮類化合物橙皮苷、柚皮苷的苷元，來源豐富，廣泛存在于蕓香科植物中，在柑橘、柚子等水果中含量頗高，且為傳統(tǒng)中藥枳實、枳殼中的重要有效成分。研究表明，橙皮素、柚皮素具有促進(jìn)胃腸蠕動、解痙、抗炎癥、抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)心血管和調(diào)節(jié)血糖等藥效作用。已有研究表明橙皮素、柚皮素可抑制CYP450s活性，但是否影響UGTs的活性未見研究報道，是否會產(chǎn)生基于UGTs介導(dǎo)的臨床藥物相互作用，值得深入探討，為指導(dǎo)臨

2、床合理用藥提供理論與實驗依據(jù)。
　　目的：
　　以重組表達(dá)的人UGTs作為酶源，選用4-甲基傘形酮（4-MU）為11種UGTs酶的廣譜探針底物，三氟拉嗪（TFP）為UGT1A4的特異性探針底物，系統(tǒng)研究探討橙皮素、柚皮素對12種尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGTs）活性的影響，并通過體外-體內(nèi)推導(dǎo)法預(yù)測發(fā)生藥物間相互作用的風(fēng)險，為臨床合理用藥提供理論與實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、橙皮素、柚皮素對UGTs抑制作

3、用的初步篩選
　　將低、中、高濃度（1,10,100μM）橙皮素、柚皮素分別加入含12種UGTs的孵育體系中，測定4-MUG/TFP-G濃度，計算酶剩余活性，初步評價橙皮素、柚皮素對12種UGTs酶亞型的影響。
　　2、橙皮素、柚皮素對UGTs酶動力學(xué)影響機(jī)制分析
　　根據(jù)初步評價結(jié)果，選擇系列濃度的橙皮素、柚皮素分別加入至有影響的UGTs酶體系中，計算酶剩余活性，并用軟件Prism5計算IC值。根據(jù)IC50<10μM

4、的UGTs亞型，選取3個適宜的抑制劑濃度和3個底物濃度進(jìn)一步研究，通過Dixon圖和Lineweaver-Burk圖判斷其抑制類型并計算酶動力學(xué)參數(shù)Ki值。
　　3、臨床藥物間相互作用的風(fēng)險預(yù)測
　　根據(jù)文獻(xiàn)中人體攝入橙皮素、柚皮素的清除率，Cmax以及橙皮素、柚皮素在體內(nèi)的解離常數(shù)和UGTs酶抑制動力學(xué)參數(shù)Ki值等數(shù)據(jù)，計算出[I]in vivo/Ki，并根據(jù)[I]/Ki>1高風(fēng)險；0.1<[I]/Ki<1中等風(fēng)險；[I]

5、/Ki<0.1低風(fēng)險三種情況來預(yù)測臨床藥物間發(fā)生相互作用的風(fēng)險。
　　結(jié)果：
　　1、橙皮素、柚皮素對UGTs抑制作用的初步篩選結(jié)果
　?、俪绕に卦诮K濃度為100μM時，UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT2B4的酶剩余活性均小于50％。
　?、阼制に卦诮K濃度為100μM時，UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、U

6、GT1A10、UGT2B7、UGT2B15的酶剩余活性均小于50%。
　　2、橙皮素、柚皮素對UGTs酶動力學(xué)影響機(jī)制分析
　?、俪绕に貙GT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT2B4抑制作用的IC50值分別為4.72±0.52μM,9.19±0.37μM,63.87±3.67μM,29.68±1.87μM,74.75±4.73μM,3.94±0.17μM，32.73±1.6

7、7μM。根據(jù)IC50<10μM的UGTs亞型，進(jìn)一步分析得出橙皮素可非競爭性抑制UGT1A1、混合競爭性抑制UGT1A3、UGT1A9參與的4-MU的葡萄糖醛酸化反應(yīng)，其Ki值分別為9.63±0.87μM,0.99±0.08μM,3.41±0.35μM。
　?、阼制に貙GT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B7、UGT2B15抑制作用的 IC50值分別為8.57

8、7±0.65μM,10.85±0.37μM,55.21±1.54μM,31.91±1.87μM,26.77±0.56μM,15.34±0.39μM,38.35±1.05μM,3.47±0.52μM,32.51±2.03μM。根據(jù)IC50<10μM的UGTs亞型,進(jìn)一步分析得出柚皮素作為強(qiáng)抑制劑，可非競爭性抑制UGT2B7活性，其Ki值為1.39±0.21μM；非競爭性抑制UGT1A1活性，其Ki值為7.61±0.56μM；反競爭性抑制U

9、GT1A3活性，其Ki值為85.76±1.67μM。
　　3、臨床藥物間相互作用的風(fēng)險預(yù)測分析
　　橙皮素抑制UGT1A3及柚皮素抑制UGT2B7的0.1<[I]in vivo/Ki<1，預(yù)測橙皮素、柚皮素與經(jīng)過UGT1A3、UGT2B7代謝的臨床藥物發(fā)生相互作用的風(fēng)險較強(qiáng)，故臨床合用時應(yīng)足夠重視。
　　結(jié)論：
　　1、橙皮素可競爭性抑制UGT1A1、混合競爭性抑制UGT1A3、UGT1A9介導(dǎo)的葡萄糖醛酸化反應(yīng)