創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機(jī)制與藥物治療.pdf

1、腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)，腫瘤被稱為永不愈合的創(chuàng)傷。創(chuàng)傷修復(fù)過程與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程在信號(hào)傳導(dǎo)方面有很多相同之處，創(chuàng)傷修復(fù)一直被認(rèn)為是促癌因素之一。然而，創(chuàng)傷治愈是組織器官恢復(fù)功能的必要條件，是否治愈創(chuàng)傷能夠阻止腫瘤發(fā)展未有報(bào)道。基于中醫(yī)―創(chuàng)傷治愈需元?dú)獬渥愕挠^點(diǎn)，我們提出―創(chuàng)傷治愈微環(huán)境可以阻止癌癥的發(fā)生。為驗(yàn)證此科學(xué)假設(shè)的正確性，我們開展了創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑肺癌機(jī)制與藥物治療研究。
　　本研究首先用小鼠全層皮膚切除創(chuàng)傷模

2、型篩選出有創(chuàng)傷愈合作用的藥物，通過血流灌注量、小鼠耳腫脹抗炎模型、巨噬細(xì)胞的吞噬作用觀察藥物治療創(chuàng)傷的特點(diǎn)，根據(jù)藥物作用特點(diǎn)進(jìn)行創(chuàng)傷愈合藥物組合。接著，我們用創(chuàng)傷愈合藥物組合體外處理 A549、BEAS-2B和L929細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖；劃痕標(biāo)記染料示蹤法觀察細(xì)胞連接通訊功能；軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)細(xì)胞自我更新能力。最后，我們采用烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型觀察創(chuàng)傷愈合藥物組合營(yíng)造的創(chuàng)傷治愈微環(huán)境對(duì)小鼠肺癌發(fā)展的影響，體重和

3、自主活動(dòng)檢測(cè)考察藥物組合對(duì)小鼠正常生理的影響；肺部病理變化、肺癌發(fā)生率及肺腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)檢測(cè)藥物組合對(duì)腫瘤發(fā)生的影響；免疫組化檢測(cè)細(xì)胞增殖標(biāo)記物ki67及凋亡相關(guān)標(biāo)志物cleaved caspase-3；Western blot檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4及Nanog，細(xì)胞通訊標(biāo)志物細(xì)胞間隙連接蛋白Connexin43，上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物 E-鈣粘蛋白，N-鈣粘蛋白及波形蛋白。另外，為了進(jìn)一步探索創(chuàng)傷治愈微環(huán)境抑制腫瘤發(fā)展的機(jī)制，我們?cè)?/p>

4、烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型中用脂多糖氣管滴注，氯屈膦酸鈉脂質(zhì)體腹腔注射，博來霉素氣管滴注觀察了肺炎癥、肺巨噬細(xì)胞耗竭和肺損傷對(duì)肺癌發(fā)展及藥物組合的影響，重點(diǎn)用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞炎癥標(biāo)志物腫瘤壞死因子α（TNFα）、髓過氧化物酶（MPO），和細(xì)胞損傷標(biāo)志物活性氧（ROS）、8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）。實(shí)驗(yàn)表明，在篩選的藥物中，烏頭堿，紫草素和三七皂苷R1較快的促進(jìn)了小鼠全層皮膚切除創(chuàng)傷愈合；三七皂苷R1及烏頭堿在激光散斑儀檢測(cè)中增

5、加了創(chuàng)傷局部的血流灌注量；僅紫草素對(duì)TPA引起的小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用；而三七皂苷R1及烏頭堿在巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)了吞噬能力增強(qiáng)作用。因此，我們將三個(gè)藥物組合成創(chuàng)傷治愈復(fù)合物營(yíng)造創(chuàng)傷治愈微環(huán)境用于體內(nèi)外觀察創(chuàng)傷治愈微環(huán)境對(duì)腫瘤發(fā)展的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，0.2μM~1μM紫草素能抑制ECV304細(xì)胞增殖；2μM~10μM三七皂苷R1抑制L929細(xì)胞增殖而促進(jìn)了ECV304的增殖，0.02μM~0.1μM烏頭堿促進(jìn)了L929的增殖，而

6、三個(gè)藥物組合促進(jìn)了L929細(xì)胞和ECV304細(xì)胞的增殖而并不抑制A549增殖。藥物組合恢復(fù)了烏拉坦導(dǎo)致的BEAS-2B細(xì)胞間連接通訊減少，減少了A549腫瘤細(xì)胞的軟瓊脂克隆和干細(xì)胞成球數(shù)量。在烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型中，0.2mg/kg烏頭堿，2mg/kg紫草素，20mg/kg三七皂苷R1對(duì)烏拉坦化學(xué)誘導(dǎo)小鼠肺癌模型肺癌的預(yù)防率分別為50％，30%及35%，藥物組合預(yù)防率可高達(dá)90%。病理結(jié)果顯示三個(gè)藥物單獨(dú)使用雖然均能一定程度改善致癌

7、小鼠肺組織病理變化，三者聯(lián)合用藥可使致癌小鼠肺組織病理變化恢復(fù)到接近正常。免疫組化結(jié)果顯示藥物組合能顯著下調(diào)ki67和上調(diào)Cleaved Caspase-3的表達(dá)。Western實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藥物組合可以下調(diào)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4，Nanog的表達(dá)，增加連接蛋白Connexin43， E-鈣粘蛋白表達(dá)，減少 N-鈣粘蛋白，波形蛋白表達(dá)。另外，我們發(fā)現(xiàn)脂多糖氣管滴注主要增加肺臟MPO及TNFα，對(duì)小鼠肺癌并無明顯促進(jìn)作用；博來霉素氣管滴注以