JQ1誘導SUP-B15細胞凋亡的Notch1通路機制研究.pdf

1、目的：
　　費城染色體陽性(Ph+)急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是起源于淋巴祖細胞并且在第22對染色體長臂和第9對染色體長臂相互易位后產(chǎn)生了BCR-ABL融合的致癌基因的腫瘤性疾病。Ph(+)ALL屬于危險度分層較高的急性白血病，它的特點是緩解率較Ph(-)ALL低，緩解后復發(fā)時間短，預后不好?；颊唠S著長期的化療疾病緩解率可能會降低，緩解時間逐漸縮短，患者的身體長期無法耐受

2、化療所帶來的副作用，比如感染、免疫力低下等。伴隨著酪氨酸激酶抑制劑第一代產(chǎn)品針對BCR-ABL融合致癌基因靶向治療藥物的出現(xiàn)，治療慢性髓細胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)上取得了驚人的效果，使CML這個疾病從難以治療的疾病變?yōu)榇婊钇谳^長的疾病之一，之后該藥物也用于治療Ph+ALL上，同樣大大提高了該疾病的緩解率，然而在臨床用藥的過程中逐漸出現(xiàn)了耐藥情況，于是酪氨酸激酶抑制劑第二代產(chǎn)品也出現(xiàn)，但對

3、于一些基因的突變效果不令人滿意。異基因造血干細胞移植可能只有少數(shù)患者可以接受移植。因此，尋找有效一種特效的細胞毒藥物十分迫切。近年來國外研究發(fā)現(xiàn)JQ1(溴結(jié)構(gòu)域蛋白抑制劑）可抑制慢性髓細胞白血病(CML)BCR-ABLT315I基因突變細胞的增殖，而研究發(fā)現(xiàn)CML慢性期轉(zhuǎn)變?yōu)榧毙云谑怯捎贛SI2過度表達激活了MSI2-Numb-Notch1的通路。Ph+ALL也具有與CML相似BCR-ABL融合基因。那么JQ1是否對Ph+ALL細胞有抑

4、制作用， JQ1能否通過下調(diào)MSI2-Numb-Notch1通路達到抗腫瘤的作用，該研究國內(nèi)外未見報道。本研究通過體外實驗的方法觀察JQ1對人Ph+ALL細胞株SUP-B15細胞的凋亡誘導作用及對Notch1通路上MSI2、Notch1、Hes1基因的影響,探討JQ1治療Ph(+)ALL中可能的抗腫瘤機制，為臨床醫(yī)生在Ph(+)ALL的治療提供新的治療方向。
　　方法：
　　1.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細胞株24

5、h、48h、72h，實驗采用四甲基偶氮唑藍法試驗（MTT法)檢測的細胞生長抑制情況。
　　2.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細胞48h,實驗采用流式細胞術檢測細胞周期的改變。
　　3.不同濃度單藥JQ1作用SUP-B15細胞株，實驗采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測MSI2、Notch1、Hes1、Bcr-AblmRNA的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.實驗采用四甲基偶氮唑藍（ MTT）法檢

6、測結(jié)果的說明：不同濃度單藥的JQ1(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L)和SUP-B15細胞一起培養(yǎng)24h、48h、72h后，SUP-B15細胞生長有明顯的抑制現(xiàn)象。在0-4μmol/L的濃度范圍內(nèi),JQ1實驗組的細胞生長抑制率會隨著JQ1藥物濃度的升高和作用時間延長而升高，呈現(xiàn)劑量-時間依賴性。與對照組比較，在相同時間下，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.實驗采用流式細胞術檢測SUP-B15細胞周期的結(jié)果說

7、明：與對照組相比，不同濃度單藥的JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用SUP-B15細胞48h后，可以誘導細胞阻滯在S期，呈劑量依賴性。與對照組比較，在相同時間下，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。
　　3.實驗采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測的結(jié)果說明：不同濃度單藥的JQ1（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用SUP-B15細胞48h后，隨著JQ1濃度增加，MSI2、Not

8、ch1、Hes1、Bcr-AblmRNA的表達水平逐漸減少，呈劑量依賴性，在相同時間段，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.JQ1可以明顯抑制SUP-B15細胞的生長，可以有效誘導SUP-B15細胞的凋亡。
　　2.JQ1可以使SUP-B15細胞在細胞的S期被阻滯，呈劑量依賴性，從而影響細胞的生長。
　　3.JQ1可以使Notch1信號通路中關鍵基因MSI2、Notch1、Hes