基于重鏈抗體的全氟辛酸免疫檢測的研究.pdf

1、全氟辛酸（Perfluorooctanoic acid,PFOA）是一種對人體有潛在健康危害的全氟化合物（PFCs）。PFOA具有疏水疏油的特性，20世紀(jì)大量生產(chǎn)使用，對生態(tài)系統(tǒng)和人類健康的影響已經(jīng)引起人們的高度關(guān)注。現(xiàn)在，PFOA的檢測主要依賴大型儀器，比如液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS），檢測準(zhǔn)確性高，檢測限低，但是，這些方法有很大的局限性，儀器笨重，檢測昂貴，通量低，不適于現(xiàn)場的快速高通量檢測。本研究應(yīng)用抗原抗體特異性

2、結(jié)合的原理，制備一種針對PFOA的特異性抗體，用于PFOA的高通量快速檢測。我們應(yīng)用碳二亞胺法，將PFOA與牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)，合成完全抗原，經(jīng)SDS-PAGE電泳和離子色譜儀定性檢測，證明完全抗原合成成功。用三硝基苯磺酸法法測定偶聯(lián)比，計算得到偶聯(lián)比為9。以此完全抗原作為包被抗原，用重鏈抗體文庫進行篩選，得到7株陽性克隆，并對重鏈抗體基因進行修飾，利用原核生物蛋白表達系統(tǒng)進行蛋白表達，得到5個抗體蛋白，以間接競爭性ELISA方法對