FADS1基因在高甘油三酯血癥大鼠模型中表達(dá)及甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的：通過觀察FADS1在高甘油三酯血癥大鼠肝組織、BRL-3A肝細(xì)胞中表達(dá)水平及其CpG島甲基化狀態(tài)，探討FADS1在高甘油三酯血癥發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法：1、36只雄性SD大鼠，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為對照組和高血脂組，分別給予普通飼料及高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)3-5周后測血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白，建立高甘油三酯血癥大鼠模型。再選擇合適濃度的醫(yī)用脂肪乳誘導(dǎo)大鼠肝細(xì)胞BRL-3A細(xì)胞脂變，檢

2、測細(xì)胞中總膽固醇、甘油三酯含量，建立高脂細(xì)胞模型，并利用5-Aza-CdR處理高脂組細(xì)胞。
　　2、利用熒光實時定量PCR檢測大鼠肝組織及BRL-3A細(xì)胞FADS1 mRNA的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測大鼠血清及BRL-3A細(xì)胞上清液中FADS1蛋白的表達(dá)情況。
　　3、提取大鼠肝臟組織中DNA后，經(jīng)亞硫酸轉(zhuǎn)化后行PCR擴(kuò)增目的基因，并用克隆測序檢測FADS1基因甲基化水平。
　　4、將含有目的基因的質(zhì)粒使用甲基化試劑

3、SssI處理及未處理后，分別轉(zhuǎn)染至BRL-3A細(xì)胞中，利用熒光素酶報告基因載體系統(tǒng)明確甲基化對FADS1表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1、高甘油三酯血癥組大鼠血清及高脂BRL-3A細(xì)胞中甘油三酯濃度均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、高甘油三酯血癥組大鼠肝組織及高脂BRL-3A細(xì)胞中FADS1 mRNA及蛋白表達(dá)均低于對照組，而5-Aza-CdR處理高脂BRL-3A細(xì)胞后，F(xiàn)ADS1 mRNA及蛋白表達(dá)高于高脂組，差異均有

4、統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、FADS1啟動子區(qū)16個甲基化島共6個檢測位點中，高脂組甲基化水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，并且甲基化水平與甘油三酯濃度呈正相關(guān)性。
　　4、與甲基化試劑SssI未處理組相比，處理組熒光酶活性顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，表明FADS1啟動子區(qū)甲基化抑制了其基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：1、本研究利用高脂飼料喂養(yǎng)雄性SD大鼠，成功建立高甘油三酯血癥動物模型；利用醫(yī)用脂肪乳成功誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞脂