GLIPR1基因在急性髓系白血病中的甲基化及其表達(dá)研究.pdf

1、背景與目的：白血病是由細(xì)胞增殖和分化成熟失衡引起的一種常見的造血系統(tǒng)惡性疾病，其發(fā)生發(fā)展是多因素參與、多步驟的復(fù)雜過程，涉及遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)改變。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化是人類白血病中普遍存在的現(xiàn)象，與其發(fā)病密切相關(guān)。啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化（hypermethylation）是抑瘤基因、DNA修復(fù)基因、促凋亡基因失活的主要方式之一。甲基化基因不僅在白血病發(fā)病中起著重要作用，而且可能成為白血病的生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。GLIPR1

2、基因是從膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞株中克隆出來(lái)的一個(gè)新基因，研究表明，在前列腺癌等實(shí)體瘤中GLIPR1基因具有抑瘤基因的功能。Gingras等于2000年發(fā)現(xiàn)GLIPR1在分化成熟的單核細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，可作為髓系單核細(xì)胞分化的標(biāo)志物，這提示GLIPR1基因可能在急性髓系白血?。╝cute myelogenous Leukemia，AML）中表達(dá)下調(diào)并與其發(fā)病有關(guān)。但GLIPR1基因在AML中的表達(dá)水平及其調(diào)控機(jī)制不清楚，有待進(jìn)一步研究。為此，本研究

3、檢測(cè)抑瘤基因GLIPR1在急性AML細(xì)胞株和AML患者骨髓中mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平以及甲基化狀態(tài)，探討GLIPR1是否為AML的甲基化沉默基因。 方法：以5株白血病細(xì)胞株，以及70例治療前AML骨髓、57例急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）、40例慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）、125例對(duì)照骨髓和24例治療后完全緩解AML骨髓為樣本，采用RT-PCR和Western blotting檢測(cè)GLIPR1基因mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，采

4、用甲基化特異PCR （MS-PCR）方法檢測(cè)GLIPR1基因的甲基化狀態(tài)，并對(duì)GLIPR1基因mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平與其甲基化狀態(tài)的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果： （1）GLIPR1基因在AML細(xì)胞株中的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平低于CML細(xì)胞株和ALL細(xì)胞株，而甲基化水平在前者高于后者。5-aza-2dC處理細(xì)胞后，GLIPR1基因在AML細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯上調(diào)，而在CML和ALL細(xì)胞株中的表達(dá)水平上調(diào)不明顯；5-az

5、a-2dC處理細(xì)胞后，GLIPR1基因在AML細(xì)胞株中的甲基化下降程度較CML和ALL細(xì)胞株明顯。 （2）GLIPR1基因在AML骨髓中的mRNA平均表達(dá)水平明顯低于ALL骨髓、CML骨髓及對(duì)照骨髓，分別為（0.38±0.20VS0.76±0.18）、（0.38±0.20VS0.80±0.14）和（0.38±0.20VS0.85±0.12），在完全緩解AML骨髓中的平均表達(dá)水平表達(dá)明顯高于治療前骨髓（0.78±0.13VS0.3

6、6±0.20）；而在ALL和CML骨髓中的平均表達(dá)水平與對(duì)照骨髓比較無(wú)明顯差異，分別為（0.76±0.18VS0.85±0.12）和（0.80±0.14VS0.85±0.12）。 （3）GLIPR1基因在AML骨髓中的蛋白質(zhì)平均表達(dá)水平明顯低于ALL骨髓、CML骨髓及對(duì)照骨髓，分別為（0.14±0.05VS0.32±0.12）、（0.14±0.05VS0.36±0.16）和（0.14±0.05VS0.40±0.08），在完全緩解

7、AML骨髓中的平均表達(dá)水平表達(dá)明顯高于治療前骨髓（0.38±0.16VS0.16±0.07）；而在ALL和CML骨髓中的平均表達(dá)水平與對(duì)照骨髓比較無(wú)明顯差異，分別為（0.32±0.12VS0.40±0.08）和（0.36±0.16VS0.40±0.08）。 （4）GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化陽(yáng)性率明顯高于ALL骨髓、CML骨髓及對(duì)照骨髓，分別為（82.8％VS38.6％）、（82.8％VS27.5％）和（82.8％VS1

8、6.8％），在完全緩解AML骨髓中的甲基化陽(yáng)性率明顯低于治療前骨髓（17％VS83％）；而ALL和CML骨髓中的甲基化陽(yáng)性率與對(duì)照骨髓比較無(wú)明顯差異，分別為（38.6％VS16.8％）和（27.5％VS16.8％）。 （5）GLIPR1基因在AML骨髓中的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平與其甲基化水平呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： （1）GLIPR1基因在AML中出現(xiàn)高頻甲基化和表達(dá)下調(diào)/缺失，啟動(dòng)子甲基化可能是導(dǎo)致GLIPR1基因