胃癌中microRNA-375基因高甲基化及表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　胃癌是人類常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，占我國(guó)目前惡性腫瘤死亡的第一位。其早期癥狀不明顯并且缺乏有效的治療措施，因此尋找新的診斷和治療靶點(diǎn)對(duì)胃癌的早期診斷、治療以及預(yù)后具有重要的臨床意義。DNA甲基化是調(diào)控基因表達(dá)的一種重要的表觀遺傳學(xué)過(guò)程，在維持正常細(xì)胞功能、遺傳印記、胚胎發(fā)育及人類腫瘤發(fā)生中起著重要作用。腫瘤細(xì)胞中DNA甲基化異常概括為基因組整體低甲基化和抑癌基因調(diào)控區(qū)域高甲基化。MicroRNA(miRNA)是真核生物中一

2、類長(zhǎng)度約18-25個(gè)堿基的小分子非編碼RNA，腫瘤細(xì)胞中miRNA的表達(dá)受到包括DNA甲基化修飾在內(nèi)的多種機(jī)制的調(diào)控，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及演進(jìn)有著極為密切的關(guān)系。以往的研究表明miRNA-375在胃癌、食管癌等多種腫瘤中低表達(dá)，本研究應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其基因啟動(dòng)子區(qū)存在CpG島，通過(guò)檢測(cè)胃癌組織中miRNA-375基因甲基化水平及基因表達(dá)水平，探討其啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化改變是否參與胃癌組織中miRNA-375異常表達(dá)的調(diào)

3、控，并進(jìn)一步預(yù)測(cè)胃癌中miRNA-375可能調(diào)控的靶基因，為將miRNA基因甲基化作為胃癌早期診斷及治療的靶點(diǎn)提供依據(jù)。
　　方法：
　　1經(jīng)內(nèi)鏡及手術(shù)取90例新鮮組織活檢標(biāo)本，分為兩組：胃癌組54例，正常對(duì)照組36例。
　　2應(yīng)用生物信息學(xué)進(jìn)行miRNA-375基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島預(yù)測(cè)并設(shè)計(jì)甲基化特異性PCR(MSP)引物。提取基因組DNA，應(yīng)用MSP檢測(cè)組織miRNA-375基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化。
　　

4、3提取總RNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(real-time qRT-PCR)檢測(cè)組織miRNA-375基因表達(dá)。
　　4運(yùn)用TargetSean Human等生物信息學(xué)方法，預(yù)測(cè)miRNA-375可能的靶基因。
　　結(jié)果：
　　1 miRNA-375基因甲基化
　　1.1胃癌組織中miRNA-375基因甲基化胃癌組和正常對(duì)照組miRNA-375基因甲基化陽(yáng)性率分別為62.96％(34/54)和22.22％(

5、8/36)，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　1.2 miRNA-375基因甲基化與胃癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系高中分化組與低分化組miRNA-375基因甲基化陽(yáng)性率分別為44.44％(8/18)和72.22％(26/36)，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miRNA-375基因甲基化陽(yáng)性率與患者性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期(TNM分期)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2 miRN

6、A-375基因表達(dá)
　　2.1胃癌組織中miRNA-375基因的表達(dá)胃癌組miRNA-375基因的表達(dá)低于正常對(duì)照組，是其表達(dá)水平的0.148倍，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.2 miRNA-375基因表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系高中分化組miRNA-375基因表達(dá)高于低分化組，是其表達(dá)水平的3.046倍，兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miRNA-375基因表達(dá)水平與患者性別、年齡、淋

7、巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期(TNM分期)無(wú)明顯關(guān)系，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3生物信息學(xué)分析示SP1、AHR、GATA6、KLF4等可能為miRNA-375的靶基因。
　　結(jié)論：
　　1預(yù)測(cè)miRNA-375基因啟動(dòng)子區(qū)存在CpG島，并證實(shí)胃癌組織中存在miRNA-375基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化，miRNA-375基因高甲基化與胃癌組織分化程度相關(guān)。提示miRNA-375基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平檢測(cè)有助