瘦素（Leptin）在小鼠胚胎圍著床期的動(dòng)態(tài)表達(dá).pdf

1、在妊娠過(guò)程中，胚胎著床是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。胚胎著床是受精卵發(fā)育至脫帶囊胚期后對(duì)子宮內(nèi)膜的粘附入侵的一個(gè)復(fù)雜生理過(guò)程。它包括胚泡的定位、粘附及植入。胚胎著床的關(guān)鍵步驟是胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)子宮內(nèi)膜的侵入，與母體成份共同形成胎盤。滋養(yǎng)層細(xì)胞與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞之間、上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞之間的“對(duì)話”，精確調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖分化和子宮內(nèi)膜的蛻膜化，從而保證滋養(yǎng)層細(xì)胞(Trophectoderm,TE)的適度侵入[1]。人類胚胎著床發(fā)生在促黃體

2、素(Luteinizinghormone，LH)峰之后大約7～11天(day,d)，小鼠胚胎的“著床窗”在妊娠4～5d，持續(xù)24h左右，受到多種激素、生長(zhǎng)因子及粘附分子等因素的調(diào)控。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，剔除leptin基因的ob/ob小鼠由于缺乏功能性leptin而導(dǎo)致肥胖和不育，給予外源性leptin又能恢復(fù)其生育能力，但在胚胎發(fā)育第4d前停止給予leptin，妊娠又將中斷[2,3]。因此體內(nèi)一定水平的leptin是保證生殖功能正常的前提

3、，過(guò)高或過(guò)低都可能破壞這種平衡，影響生殖功能，甚至導(dǎo)致不孕。 為了更好地理解leptin在胚胎圍著床期中的作用，我們采用了RT-PCR、免疫組化和免疫熒光等分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)探討胚胎圍著床期leptin在子宮組織和胚胎中的表達(dá)規(guī)律，旨在為胚胎著床機(jī)理提供新的理論依據(jù)。 試驗(yàn)一目的：探討leptin在妊娠早期小鼠子宮中的表達(dá)規(guī)律。方法：性成熟雌性NIH小鼠用孕馬血清促性腺激素(pregnantmareserumgonadot

4、rophin，PMSG)和絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotrophin，hCG)進(jìn)行超排卵，與成熟雄鼠交配，在妊娠1d-6d分別脫臼處死小鼠取其子宮，用DMEM/F12培養(yǎng)液充分沖洗子宮，然后進(jìn)行以下試驗(yàn)：1.分別提取總RNA，檢測(cè)小鼠子宮以及胚胎著床點(diǎn)和非著床點(diǎn)的子宮leptinmRNA表達(dá)規(guī)律；2.分別用10﹪福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，然后進(jìn)行免疫組織化學(xué)試驗(yàn)，檢測(cè)leptin蛋白的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果：妊

5、娠1-6d小鼠子宮均有l(wèi)eptinmRNA和蛋白表達(dá)，leptin蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮；LeptinmRNA水平呈現(xiàn)規(guī)律性表達(dá)，1d、2d表達(dá)微弱，3d開(kāi)始增強(qiáng)，4d達(dá)到高峰，5d、6d仍維持在一定水平；無(wú)論妊娠5d或6d，著床點(diǎn)leptinmRNA水平比非著床點(diǎn)顯著增強(qiáng)。結(jié)論：子宮組織表達(dá)的leptin與胚胎發(fā)育、胚胎著床的進(jìn)程有密切關(guān)系。 試驗(yàn)二目的：探討leptin在圍著床期胚胎中的表達(dá)規(guī)律。方法：性成熟雌性NIH

6、小鼠用PMSG和hCG進(jìn)行超排卵，與成熟雄鼠交配，分別在妊娠1d-3d上午脫臼處死小鼠取其輸卵管，沖取2-cell、4-cell、8-cell；在妊娠4d取其子宮角，沖取桑椹胚、囊胚。保存于-80℃，然后進(jìn)行以下試驗(yàn)：1.分別提取總RNA，檢測(cè)胚胎中l(wèi)eptinmRNA表達(dá)情況；2.試驗(yàn)當(dāng)天沖取擴(kuò)展囊胚進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn)，在激光共聚焦顯微鏡下觀察leptin蛋白的表達(dá)和分布情況。結(jié)果：leptinmRNA和蛋白僅在囊胚期特異性表達(dá)，其余各