C-erbB-,2-蛋白在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)及其對體外胚胎著床影響的研究.pdf

1、目的：探索C-erbB2蛋白在小鼠圍著床期子宮組織中的表達(dá)與定位；研究小鼠子宮內(nèi)膜上皮(endometrial epithelial cells EECs)細(xì)胞的分離、鑒定和體外培養(yǎng)技術(shù)；建立小鼠體外胚胎著床的模型和共培養(yǎng)體系；初步探討c-erbB2反義寡核苷酸(c-erbB2 ASODN)對小鼠體外胚胎著床的影響。 方法： 1、用促超排法制作妊娠小鼠的動物模型； 2、用免疫組化法觀察C-erbB2蛋白在圍著床期

2、小鼠子宮組織中的表達(dá)與定位； 3、用分步酶消化法分離培養(yǎng)EECs，并用抗細(xì)胞角蛋白(CK-19)免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定EECs； 4、將己貼壁的EECs與獲取的小鼠胚泡進(jìn)行共培養(yǎng)以建立小鼠體外胚胎著床模型，分組觀察比較胚泡在不同培養(yǎng)體系中的脫帶率、粘附率、擴展率，確定理想的共培養(yǎng)體系； 5、分組觀察比較c-erbB2 ASODN對小鼠體外胚胎著床的影響； 6、用western blotting法檢測各組EE

3、Cs中C-erbB2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、免疫組化結(jié)果顯示在未孕子宮和空白對照組子宮中未見C-erbB2蛋白的表達(dá)，D1-3天子宮中C-erbB2蛋白主要分布在子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細(xì)胞胞膜上，子宮基質(zhì)細(xì)胞中未見表達(dá)，D4-5天子宮中C-erbB2蛋白除了表達(dá)在子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細(xì)胞胞膜上，上皮下基質(zhì)細(xì)胞膜上可見弱陽性表達(dá)，D6-8天的子宮中C-erbB2蛋白主要分布在子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細(xì)胞以及圍繞著床位

4、點的蛻膜細(xì)胞胞膜上，各組肌層均未見陽性表達(dá)； 2、分步酶消化法成功分離培養(yǎng)EECs，用抗CK-19免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定EECs，其陽性率達(dá)到90％以上； 3、三組共培養(yǎng)組(無血清共培養(yǎng)、3％FBS共培養(yǎng)組、0.4％BSA共培養(yǎng)組)的脫帶率、粘附率和擴展率明顯高于胚泡單獨培養(yǎng)組(P<0.05)，3％FBS共培養(yǎng)組和0.4％BSA共培養(yǎng)組的脫帶率、粘附率和擴展率又明顯高于無血清共培養(yǎng)組(P<0.05)，而3％FBS共培養(yǎng)組的

5、脫帶率、粘附率、擴展率和0.4％BSA共培養(yǎng)組相比，差別無顯著性(P>0.05)； 4、用c-erbB2 ASODN干預(yù)著床模型結(jié)果顯示：各組24小時脫帶率差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；51μmol/L c-erbB2 ASODN組48小時粘附率與擴展率低于對照組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，10μmol/Lc-erbB2 ASODN組48小時粘附率與擴展率明顯低于對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，15、20

6、μmol/L c-erbB2 ASODN組48小時粘附率與擴展率顯著低于對照組，差別有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而20μmol/L c-erbB2 ODN組48小時的粘附率和擴展率與對照組相比無差別(P>0.05)； 5、Western Blotting法檢測c-erbB2 ASODN各組EECs中C-erbB2蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：不同濃度的c-erbB2ASODN作用著床模型48小時后，5gmol/L c-erbB2 AS

7、ODN組蛋白的表達(dá)低于對照組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，10μmol/L c-erbB2 ASODN組表達(dá)明顯低于對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，15、20μmol/L c-erbB2 ASODN組蛋白的表達(dá)顯著低于對照組，差別有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；另外，20μmol/Lc-erbB2 ASODN作用24小時后C-erbB2蛋白表達(dá)低于對照組(P<0.05)，20μmol/Lc-erbB2 ASODN作用