黑曲霉產(chǎn)果膠酶的分離純化和酶學(xué)特性研究.pdf

1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文黑曲霉產(chǎn)果膠酶的分離純化和酶學(xué)特性研究姓名：湯鳴強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：謝必峰20040401A B S T A C TP e e t i n a s ei s ac o l l e c t i v ec a l l f o ra n ye n z y m ew h i c h b r e a k s d o w np e c t i c s u b s t a n c e ．P

2、r i m a r i l y ，i tc o n t a i n s c o m p o n e n t s s u c h a s p o l y g a l a c t u r o n a s e , p e c t i n e s t e r a s e a n dp e c t i nl y a s e ．E a c h c o m p o n e n t d i f i e f s f r o m o t h e r s i

3、 n t h e m e c h a n i s mo f r e a c t i o n a n d i t sc h a r a c t e r i s t i c s ．A s p e r g i l l u s n i g e r w a st h e m a j o r g e n e r a o f m i c r o o r g a n i s m s p r o d u c i n gp e c t i n a s ei

4、 n i n d u s t r y ．I no r d e r t oe x p l o i tt h ec a p a c i t yo f A s p e r g i l l u sn i g e ri np r o d u c i n g t h ee n z y m e a n dk n o w m u c h a b o u t i t se n z y m o l o g i c a l c h a r a c t e r

5、 i s t i c s ，i t i s o f m o r es i g n i f i c a n t t oc a l T y o u tt h i sp a p e r ．I n t h i ss t u d y ，t h ep r o d u c t i o n c o n d i t i o n so f t h r e ec o m p o n e n 協(xié)o f p e c t i n a s ef r o mA s p

6、 e r g i l l u sn i g e rS L 2 —1 1 1 w e r ei n v e s t i g a t e d ．T h et w o m a i nc o m p o n e n t so f p e c t i n a s en a m e l y P G a n dP E W e r ei s o l a t e d ，p u r i f i e da n d c h a r a c t e r i z

7、e d ．M a j o r r e s u l t sw m a sf o l l o w s ：( 1 ) T h e m e d i u m c o n t a i n i n g s e e d c a p s u l e c o u l d i m p r o v e p e c t i n a s e p r o d u c t i o n i ns o l i d - s t a t e f e r m e n t a t

8、 i o n ．T h eo p t i m a l m e d i u ma n d c u l t u r ec o n d i t i o nf o rP G 、P Ea n d P Lp r o d u c t i o n w e r ed i f f e r e n t ．U n d e rt h eb e s tc o n d i t i o n ．t h ea c t i v i t yo f P G 、P Ea n d

9、P Lp e rg r a ml e a v e nw e r e 2 6 9 5 U ／g 、3 2 9 7 5 U ／ga n d O ．1 7 7 U ／gr e s p e c t i v e l y ．( 2 ) T w oc o m p o n e n t so f p e e t i n a s en a m e l yP Ga n d P Ew e r ep u r i f i e df r o mA s p e r g

10、 i l l u sn i g e r p e c t i n a s ep r e p a r a t i o n b y a m m o n i u m s u l f a t ef r a c f i o n a f i o n ，D E A ES e p h a r o s e F a s tF l o wi o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y , S e p h a

11、c r y l S ·2 曲g e lf i l t r a t i o n ．B o m P G a n dP E w e r eh o m o g e n e o u s o n p o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ．( 3 ) T h em o l e c u l a r I T I a S S o f P E w a s 4 8 ．

12、8 k D a ，t h eo p t i m a l p H a n d t e m p e r a t u r ew a s 5 ．8 a n d6 0 ℃r e s p e c f i v e l y ．P E w a s s t a b l ei nt h er a n g eo f p H f r o m 4 ．2 t o7 ．0 ．A f t e r 6 0m i n i n c u b a t i o na t5 0 0

13、C ，t h i sc o m p o n e n t o f p e c i i n a s e r e m a i n e d 4 0p e r c e n t o f t h e t o t a l a c t i v i t y ．( 4 ) T h e m o l e c u l a r m a s s o f P G w a s 7 1 ．5 k D a ，t h e o p t i m a l p Ha n d t e m

14、 p e r a t u r e W a S 3 ．0 a n d6 5 “ C r e s p e c t i v e l y ．P Gw a s s t a b l ei nt h e r a n g eo f p H f r o m 2 ．6t o5 ．4 ．A f t e r 6 0m i n i n c u b a t i o na t 5 0 ℃．t h i sc o m p o n e n t o f p e c t i

15、n a s er e m a i n e d 4 1p e r c e n t o f t h et o t a l a c t i v i t y ．M e t a li o n ss u c ha sC p ，L i + ，C u z + ，M g z + ，K + c o u l d s t i m u l a t eP G a c t i v i t y , e s p e c i a l l y t h es t i m u

16、l a t i o no f C a 2 +w a s m o r e r e m a r k a b l e t h a no t h e r s ．M n a + a n d A 礦W e r e i n h i b i t o mo f P G a c t i v i t y ．P Gh a d ah i g h e r c o n t e n t o f a c i d i c a m i n oa c i ds u c h a

17、 s A s p ，T h r , S e r , G i n ，V a l ．I n c o n t r a s t ，c o n t e n t o fa l k a l i n ea r n i n O a c i ds u c ha sH i sW a S m o r e 1 0 w e r t h a nt h ea c i d i c o n e s ．K e y w o r d s ：A s p e r g i l l u