高溫堿性果膠酶菌株的分離、特性研究及果膠酶基因的表達(dá).pdf

1、果膠酶是分解果膠的多種酶的總稱,可用于植物纖維中的果膠質(zhì)的分解。堿性果膠酶指在堿性條件下,能夠解聚果膠物質(zhì)a-1,4糖苷鍵的酶,一般多指聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)。它除在植物病毒的純化、紙漿漂白等方面得到應(yīng)用以外,也廣泛應(yīng)用在棉織物處理、植物韌皮纖維脫膠、果膠廢水的處理.堿性果膠酶的使用將改變傳統(tǒng)的棉織物處理工藝,不僅減少環(huán)境污染,而且節(jié)約了大量的工藝用水。 本研究從高溫堆肥樣品中分離得到一株產(chǎn)堿性果膠酶的高溫菌株,該菌株為革

2、蘭氏陽性細(xì)菌,直桿狀,菌落圓形,灰白色。16S rDNA序列分析表明,該菌株與Bacillus lichniformis有100％的同源性,初步命名為Bacillus licheniformis DG-3。其生長(zhǎng)溫度范圍為15～55℃,最適生長(zhǎng)溫度為50℃。該菌株發(fā)酵液的堿性果膠酶酶活為14.87U/mL。對(duì)Bacillus licheniformis DG-3菌株所產(chǎn)堿性果膠酶的初步研究表明,該酶適宜溫度范圍60～70℃,最適溫度為6

3、5℃.適宜pH值為9.8～10.5。最適pH值為10.0。 通過PCR擴(kuò)增的方法,從DG-3菌株中擴(kuò)增出堿性果膠酶的結(jié)構(gòu)基因pe1A,序列分析表明,所獲PelA基因與已報(bào)道的B.licheniformis 14A菌株的pe1A基因的同源性為100％。將pe1A基因在大腸桿菌中表達(dá),產(chǎn)生具有活性的堿性果膠酶,發(fā)酵液菌體的堿性果膠酶酶活為12U/mL。4～8 mmol/L的Ca2+對(duì)堿性果膠酶具有顯著的激活作用。 本研究以甲