堿性果膠酶高產(chǎn)菌株的篩選及其發(fā)酵研究.pdf

1、從堿性土壤中分離得到一株高產(chǎn)堿性果膠酶的菌株TCCC11286，對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)特征和生理生化鑒定，確定其為革蘭氏陽(yáng)性，桿菌，有芽孢；并用16SrDNA方法分析，該菌株與枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的序列相似性為99％，因而鑒定其為枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。
　　 利用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)枯草芽孢桿菌TCCC11286的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。采用Plackett-Burman(P-B)方法篩選出對(duì)產(chǎn)酶有重要

2、影響的3個(gè)因素(豆餅粉，MgSO4以及FeSO4的添加量)，并采用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)(RSM)對(duì)重要因素進(jìn)行優(yōu)化。最佳培養(yǎng)基為：玉米粉4％，豆餅粉3.55％，MgSO40.034％，(NH4)2SO40.4％，磷酸鹽0.05 mol/L，F(xiàn)eSO40.013％。最佳培養(yǎng)條件為：種齡12 h，接種量8％，培養(yǎng)溫度37℃，發(fā)酵周期24 h。在此條件下產(chǎn)酶率為14.82 U/mL。
　　 通過對(duì)酶學(xué)性質(zhì)的研究可得知：酶的最適反應(yīng)溫度為45

3、℃-55℃，最適酶作用pH8.5-9.5；酶的熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在45℃-60℃時(shí)均可保持較高的活性，大于60℃時(shí)，酶活顯著下降；酶的pH穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在45℃條件下，分別于不同pH值的底物溶液中保溫30 min，在pH8.0-10.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。
　　 堿性果膠酶粗酶經(jīng)過硫酸銨鹽析，透析袋濃縮，通過SDS-PAGE電泳，測(cè)定出其相對(duì)分子質(zhì)量約為41kD。
　　 應(yīng)用蛋白雙向電泳技術(shù)研究了枯草芽孢桿菌不同