阻塞性睡眠呼吸暫?；颊咄庵苎獌?nèi)皮祖細(xì)胞參與內(nèi)皮修復(fù)機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的：阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA)的嚴(yán)重程度與心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。OSA模式的間歇低氧(IH)是內(nèi)皮功能障礙的主要病生理機(jī)制。低氧程度越重，間歇低氧頻率越高，心血管事件發(fā)生率亦越高。內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)可維持血管內(nèi)皮間的動(dòng)態(tài)平衡，參與血管修復(fù)。EPC數(shù)量的降低可預(yù)測(cè)未來(lái)心血管事件的發(fā)生。因此本研究通過(guò)招募不同程度的OSA患者并對(duì)其進(jìn)行分組，測(cè)定不同程度OSA患者外周血EPC的不同亞族及促血管生成因子的水平，并對(duì)外周血中單個(gè)

2、核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行體外培養(yǎng)，在此基礎(chǔ)上測(cè)定EPC的增殖、遷移及血管形成能力，從而進(jìn)一步探討OSA患者外周血EPC參與內(nèi)皮修復(fù)的機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：連續(xù)納入2013年12月-2014年12月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院呼吸科睡眠診療中心就診的90例OSA患者，其中男76名，女14名，年齡40-79歲，同期納入30名性別、年齡相匹配的健康志愿者(對(duì)照組)，分別進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)(PSG)，依據(jù)睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)分為輕中重度。

3、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定患者外周血低氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平；密度梯度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，依據(jù)乙醛脫氫酶(ALDH)活性聯(lián)合CD133、CD34、含激酶域插入片段受體(KDR)相應(yīng)的 EPC表面標(biāo)志物，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定CD133+KDR+EPC、CD133+CD34+EPC、CD34+KDR+EPC、ALDHloCD34+KDR+EP

4、C的水平；并對(duì) PBMCs進(jìn)行體外培養(yǎng)，測(cè)定 EC-CFU的增殖能力；通過(guò)Transwell細(xì)胞模型觀察EPC的遷移能力；Western測(cè)定EPC表面膜蛋白的表達(dá)水平；與HUVEC共培養(yǎng)測(cè)定EPC的成管能力。采用SPSS17.0軟件分析包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：（1）各組患者年齡、性別間均無(wú)顯著差異；各組患者體質(zhì)指數(shù)差異明顯（F=101.800，P=0.000），其中重度OSA組（33.43±2.03）>中度OSA（28.57±

5、0.77）>輕度 OSA組（25.63±2.97）>對(duì)照組（23.77±2.73）；各組患者 AHI差異顯著（ F=127.700， P=0.000），其中重度 OSA組（68.43±28.10）>中度 OSA組（22.73±4.02）>輕度OSA組（11.50±3.10）>對(duì)照組（1.73±1.41）；各組患者最低血氧飽和度差異顯著（F=141.300，P=0.000），重度OSA組（0.509±0.168）<中度OSA組（0.822

6、±0.150）<輕度OSA組（0.874±0.020）<對(duì)照組（0.922±0.186）。（2）各組患者外周血CD133+KDR+EPC、CD133+CD34+EPC、CD34+KDR+EPC水平差異顯著（F=34.340、49.250、84.755，P均=0.000），重度OSA組CD133+KDR+EPC（119.20±45.50）>中度OSA組（97.34±16.18）>輕度OSA組（76.65±31.91）>對(duì)照組（51.90±

7、18.85）；CD133+CD34+EPC水平重度OSA組（76.65±31.91）>中度OSA組（45.19±18.23）>輕度OSA組（31.91±8.89）>對(duì)照組（18.71±8.50）；CD34+KDR+EPC水平重度OSA組（239.44±87.23）>中度OSA組（123.42±32.73）>輕度 OSA組（86.09±17.03）>對(duì)照組（53.29±18.78）；各組患者外周血中ALDHloCD34+KDR+EPC水平

8、差異顯著（F=37.383，P=0.000），其中輕度OSA組最高（37.69±11.16），重度OSA組最低（13.01±6.36），中度OSA組（20.45±8.99）<對(duì)照組（29.52±11.15）。
　?。?）各組血清 HIF-1、SDF-1、VEGF水平差異明顯（F=129.500、69.450、1183.000，P均=0.000），其中HIF-1、SDF-1、VEGF水平重度OSA組最高（2.56±0.26，2173

9、±316.5，155.6±12.80），對(duì)照組最低（1.30±0.21，1180±313.2，36.79±5.59），中度OSA組（1.87±0.35，1971±275.5，98.00±7.00）>輕度OSA組（1.70±0.15，1587±241.7，53.29±6.57）。
　　（4）各組患者外周血EC-CFU數(shù)量差異顯著（F=48.860，P=0.000），其中輕度OSA組EC-CFU數(shù)量最多（73.000-20.020），

10、重度OSA組最少（22.070-9.993），中度OSA組（37.330-17.00）<對(duì)照組（45.970-18.200）。
　?。?）各組患者外周血 EPC遷移的數(shù)量差異明顯（F=26.670，P=0.000），其中輕度 OSA組 EPC遷移數(shù)量最多（62.100-25.560），重度 OSA組最少（16.470-7.785），中度OSA組（34.230-21.640）<對(duì)照組（49.570-23.790）。（6）各組患者EP

11、C表面CXCR4、VEGFR2蛋白表達(dá)灰度值差異明顯（F=481.700、195.700，P均=0.000），其中輕度OSA組EPC表面CXCR4、VEGFR2蛋白表達(dá)灰度值最高（1.263-0.012，1.562-0.023），重度OSA組最低（0.545±0.038，0.745±0.038），中度OSA組（0.699-0.021，0.987-0.020）<對(duì)照組（0.988±0.018，0.776±0.059）。
　?。?）各

12、組患者平均血管生成長(zhǎng)度差異顯著（F=120.100，P=0.000），其中輕度OSA組平均血管生成長(zhǎng)度最長(zhǎng)（3882.000-477.500），重度 OSA組最短（2000.000-551.200），中度 OSA組（2559.000-303.700）<對(duì)照組（3423.000-300.600）。
　　結(jié)論：（1）BMI是OSA發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可增加OSA的患病率，加重OSA的嚴(yán)重程度。
　?。?）OSA患者程度的加重可導(dǎo)