靶向阻斷Tim-3調(diào)控CD8+T細(xì)胞對膠質(zhì)瘤殺傷的實驗研究.pdf

1、目的：
　　體外實驗觀察靶向阻斷免疫檢查點分子Tim-3調(diào)控CD8+T細(xì)胞對膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫殺傷的作用，并初步探討其關(guān)鍵分子和免疫機制。
　　方法：
　　通過免疫磁珠法分離提純?nèi)梭w外周血中的CD8+T細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測CD8+T細(xì)胞的純度；在分選的CD8+T細(xì)胞中加入CD3/CD28刺激因子使其擴增，通過IL-12上調(diào)Tim-3的表達；將上述CD8+T細(xì)胞分為2組：封閉組加入抗-Tim-3單克隆抗體，對照組加入同型

2、IgG；采用膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251、U87與2組CD8+T細(xì)胞在體外共培養(yǎng)72h；分別收集共培養(yǎng)體系中的膠質(zhì)瘤細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞及上清液；CCK-8法檢測兩組膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活力、CFSE法檢測CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖能力、ELISA法測定上清液中IFN-γ和TGF-β的水平變化、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測膠質(zhì)瘤凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　共培養(yǎng)體系2組CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞增殖水平低于正常培養(yǎng)組，同型IgG對

3、照組CD8+T細(xì)胞的增殖能力低于封閉組（P<0.05）；同型IgG對照組中2種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的細(xì)胞活力高于封閉組（P<0.05）；同型IgG對照組膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡率低于封閉組；同型IgG組上清液里IFN-γ水平低于封閉組，而TGF-β則高于封閉組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　Tim-3在膠質(zhì)瘤免疫逃逸的過程中發(fā)揮著重要作用，靶向封閉Tim-3通路可顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87和U251的增殖，同時恢復(fù)CD8+T細(xì)胞數(shù)量和殺傷