CD4+CD28-T細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡免疫病理損傷的機(jī)制研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種慢性自身免疫性疾病，其特點(diǎn)是自身免疫耐受機(jī)制失衡，免疫功能紊亂，機(jī)體產(chǎn)生大量針對細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞表面成分的自身抗體。SLE患者的免疫功能失衡包括自身反應(yīng)性T細(xì)胞的產(chǎn)生及高反應(yīng)性的B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體。SLE患者的T細(xì)胞可以給B細(xì)胞提供過度的幫助，但可惜的是，不能對于外界抗原的侵襲給予足夠的抵御。在細(xì)胞因子水平，T細(xì)胞無法產(chǎn)生足夠的細(xì)胞因子IL-2，

2、同時(shí)產(chǎn)生過多的IL-17與IL-10。同時(shí)存在各種亞型的T細(xì)胞，包括Th17細(xì)胞浸潤在腎臟組織中，造成病理破壞，所以進(jìn)一步研究各種亞型T細(xì)胞的異常功能，以及在SLE患者中的作用，對于進(jìn)一步探索SLE的發(fā)病機(jī)制是很有幫助的。
　　CD28是T細(xì)胞表面的共刺激分子，對T細(xì)胞的活化、增殖起著重要的作用。既往研究表明，長期的自身抗原、外界抗原刺激T細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致共刺激分子CD28的丟失，從而導(dǎo)致CD4+CD28-T細(xì)胞的數(shù)量不斷聚集。而CD

3、4+CD28-T細(xì)胞的表型及功能，與正常的CD4+CD28+T細(xì)胞相比較，同樣也會(huì)發(fā)生巨大的變化，比如獲得了毒性殺傷性作用，更多的IFN gamma的分泌，NK細(xì)胞表面分子的表達(dá)以及趨化因子的表達(dá)異常。在一些炎性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，急性心肌梗死中，CD4+CD28-T細(xì)胞的數(shù)量與正常人相比較是增加的，并且發(fā)現(xiàn)這群細(xì)胞在一些炎性疾病存在組織浸潤性。考慮到SLE患者體內(nèi)發(fā)生著劇烈的體液免疫和細(xì)胞免疫，均需要CD4+T細(xì)胞的協(xié)同作

4、用，可能會(huì)加劇了CD28分子的丟失，以及CD4+CD28-T細(xì)胞具有強(qiáng)大的破壞作用，是否會(huì)在SLE疾病進(jìn)程中發(fā)揮作用，是進(jìn)一步值得研究與思考的。
　　IL-15是一種細(xì)胞因子，IL-15R包含三個(gè)亞基單位α，β，γ，通過跨膜傳遞的方式傳遞信號，也就是IL-15首先與IL-15Rα形成復(fù)合體，把信號傳遞給表達(dá)IL-15Rβγ的細(xì)胞，包括CD8+T細(xì)胞，NK細(xì)胞。IL-15的主要功能是給效應(yīng)殺傷性T細(xì)胞提供共刺激信號，并促進(jìn)組織浸潤的

5、殺傷性T細(xì)胞的功能，進(jìn)一步加強(qiáng)組織破壞性。而CD4+CD28-T細(xì)胞具備NK細(xì)胞表面分子，細(xì)胞殺傷性功能，以及組織浸潤性等特征。因此本研究將針對IL-15對于CD4+CD28-T細(xì)胞的數(shù)量及功能，以及參與SLE免疫病理損傷的可能機(jī)制進(jìn)行探討。為解決以上提出的問題，本實(shí)驗(yàn)分為兩部分:
　　第一部分 CD4+CD28-T細(xì)胞在SLE中表型功能變化及組織浸潤性
　　目的：觀察SLE患者與正常人群外周血CD4+CD28-T細(xì)胞的比例

6、以及表型變化，分析該群細(xì)胞在SLE免疫病理損傷中的作用和意義。
　　方法:采用流式細(xì)胞術(shù)檢測44名SLE患者、22名正常對照人群的外周血中CD4+CD28-T細(xì)胞的比例以及SLE患者、正常對照人群患者CD4+CD28-T細(xì)胞的NK細(xì)胞受體表達(dá)水平，趨化因子、粘附分子表達(dá)水平與對應(yīng)的CD4+CD28+T細(xì)胞對比;采用免疫熒光的方法檢測SLE患者腎臟活檢標(biāo)本和對照組正常人腎臟中CD4+CD28-T細(xì)胞的浸潤情況。
　　結(jié)果:SL

7、E患者外周血中的CD4+CD28-T細(xì)胞的比例顯著高于正常對照組，并且SLE患者及正常對照組CD4+CD28-T細(xì)胞表達(dá)NK細(xì)胞受體水平、粘附分子水平、趨化因子、凝集素，明顯高于對應(yīng)的CD4+CD28+T細(xì)胞，但是SLE患者與正常對照人群的CD4+CD28-T細(xì)胞分子表達(dá)水平?jīng)]有差異。另外，在腎小管間質(zhì)中可見CD4+CD28-T細(xì)胞大量浸潤，而在正常對照的腎臟標(biāo)本中，未見CD4+CD28-T細(xì)胞浸潤。
　　結(jié)論:在SLE患者外周血

8、中CD4+CD28-T細(xì)胞的比例升高。并且這些細(xì)胞與CD4+CD28-T細(xì)胞相比較，具有更高的NK細(xì)胞受體分子、粘附分子、趨化因子、凝集素分子表達(dá)量水平，提示CD4+CD28-T細(xì)胞具備殺傷性功能及遷徙能力。另外通過免疫熒光證實(shí)，證實(shí)CD4+CD28-T細(xì)胞在狼瘡腎炎中大量浸潤，提示其介導(dǎo)了狼瘡腎炎免疫病理損傷過程。
　　第二部分 IL-15促進(jìn)CD4+CD28-T細(xì)胞在SLE中免疫損傷功能
　　目的:探索IL-15在SLE

9、患者腎臟的表達(dá)情況，對CD4+CD28-T細(xì)胞的功能影響，以及促進(jìn)SLE腎臟免疫損傷的機(jī)制。
　　方法:采用免疫熒光的方法檢測SLE患者腎臟活檢標(biāo)本和對照組正常人腎臟中表達(dá)IL-15的巨噬細(xì)胞的浸潤情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度IL-15對于SLE患者、正常對照人群的外周血中CD4+CD28-T細(xì)胞的功能影響;以及IL-15預(yù)處理CD4+CD28+T細(xì)胞與CD4+CD28-T細(xì)胞后，共培養(yǎng)腎小球上皮細(xì)胞，觀察促進(jìn)凋亡效能。
　

10、　結(jié)果:通過免疫熒光證實(shí)，分泌IL-15的巨噬細(xì)胞在狼瘡腎炎中大量浸潤，提示IL-15介導(dǎo)了狼瘡腎炎免疫病理損傷過程。并且體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，IL-15可以促進(jìn)CD4+CD28-T細(xì)胞的增殖、殺傷表型、干擾素分泌以及趨化能力。最后，細(xì)胞共培養(yǎng)證實(shí)CD4+CD28-T細(xì)胞可誘導(dǎo)更多的腎小球上皮細(xì)胞的凋亡損傷。
　　結(jié)論:IL-15可以促進(jìn)CD4+CD28-T細(xì)胞的多種功能，從而介導(dǎo)SLE免疫損傷，是一種新型的免疫損傷機(jī)制。并且阻斷IL-1