阻滯與非阻滯品系小鼠次級卵母細(xì)胞基因表達(dá)水平的比較及FGF7對小鼠植入前胚發(fā)育的影響.pdf

1、目的：檢測阻滯品系(昆明)小鼠與非阻滯品系(B6C3F1)小鼠次級卵母細(xì)胞基因表達(dá)水平的差異；觀察成纖維細(xì)胞生長因子7(fibroblast growth factor7，F(xiàn)GF7)對KM小鼠植入前胚發(fā)育和克服2-細(xì)胞阻滯的作用。
　　 方法：⑴Affymetrix表達(dá)譜芯片檢測比較KM與B6C3F1小鼠次級卵母細(xì)胞基因表達(dá)差異，并運用Real time PCR對部分差異基因進(jìn)行驗證；⑵RT-PCR和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)顯色方法檢測

2、成纖維細(xì)胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptor，F(xiàn)GFR)-1、2和3在KM小鼠卵母細(xì)胞和植入前胚中的表達(dá)與分布；⑶3.收集KM小鼠1-細(xì)胞胚，采用微滴培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)，觀察在M16培養(yǎng)液中添加FGF7蛋白對植入前胚發(fā)育的影響，觀察其是否能克服2-細(xì)胞阻滯。
　　 結(jié)果：①基因芯片檢測顯示KM與B6C3F1小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)許多與基因轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)合成等功能相關(guān)的基因表達(dá)存在差異；R

3、eal time PCR驗證結(jié)果與芯片檢測結(jié)果較為相符，證明本次芯片檢測結(jié)果較為可靠。②RT-PCR檢測顯示，F(xiàn)GFR1、FGFR2和FGFR3 mRNA在KM小鼠卵母細(xì)胞和植入前胚均有表達(dá)；免疫熒光細(xì)胞化學(xué)結(jié)合共聚焦掃描顯微鏡觀察顯示FGFR1、FGFR3免疫陽性反應(yīng)見于卵母細(xì)胞和植入前胚胞質(zhì)周邊，靠近細(xì)胞膜；FGFR2陽性反應(yīng)較均勻分布于卵母細(xì)胞和植入前胚的胞質(zhì)。③KM小鼠1-細(xì)胞胚在添加FGF7蛋白的M16培養(yǎng)液中培養(yǎng)，其4-細(xì)胞

4、胚發(fā)育率明顯高于空白M16培養(yǎng)液(對照組)，差異有顯著性意義。
　　 結(jié)論：B6C3F1小鼠卵母細(xì)胞表達(dá)上調(diào)基因主要與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、抗氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)合成與轉(zhuǎn)運、氨基酸磷酸化修飾、細(xì)胞周期、發(fā)育等功能相關(guān)，提示B6C3F1小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)與自身基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成與轉(zhuǎn)運、抗氧化等功能相關(guān)的調(diào)節(jié)更為完善，阻滯與非阻滯品系小鼠卵母細(xì)胞內(nèi)這些母源基因表達(dá)差異可能影響小鼠植入前胚體外發(fā)育能力；KM小鼠卵母細(xì)胞和植入前胚內(nèi)有成纖維細(xì)胞生長因