4-氨基水楊酸葡萄糖苷的體內(nèi)外評價及藥效學研究.pdf

1、目的：
　　基于高效液相色譜法（HPLC）建立4-氨基水楊酸（4-aminosallcylicacid，4-ASA）和4-乙酰氨基水楊酸（4-acetamidosalicylic acid，Ac-4-ASA）的含量測定方法。對4-氨基水楊酸葡萄糖苷（4-aminosalicylic acid-glucoside，4-ASA-Glu）進行 pH穩(wěn)定性考察，評價其在體內(nèi)外結腸靶向釋藥特性及對潰瘍性結腸炎大鼠的治療作用，為后續(xù)研究提供實

2、驗基礎。
　　方法：
　　本文采用HPLC建立4-ASA和Ac-4-ASA的含量測定方法。
　　分別以0.1M HCl、pH6.8磷酸鹽緩沖液、pH7.4磷酸鹽緩沖液為釋放介質(zhì)，測定4-ASA-Glu在12 h內(nèi)的穩(wěn)定性。
　　采用 HPLC，以4-ASA累積釋放率為評價指標，分別考察4-ASA-Glu（相當于4-ASA250μg/mL）在正常和潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）大鼠胃、小

3、腸、盲腸、結腸內(nèi)容物液中，37℃水浴孵育不同時間后的釋藥行為。
　　將4-ASA-Glu大鼠灌胃給藥，分別于0.5 h、l h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h各時間點采集大鼠胃、小腸、盲腸和結腸段的內(nèi)容物和血漿樣品，HPLC法檢測大鼠各段胃腸道血漿和內(nèi)容物中4-ASA和Ac-4-ASA的經(jīng)時變化。
　　采用2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-Trinitro-Benzenesulfonic acid，TNBS）建

4、立 UC大鼠模型進行藥效學研究。
　　結果：
　　4-ASA在2.0-200.0μg/mL范圍內(nèi)，線性關系良好（r>0.995），方法回收率為（89.54±0.60）％～（97.02±0.20）%，日內(nèi)RSD小于4.58%，日間RSD小于5.48%。Ac-4-ASA的線性范圍為2.0-100.0μg/mL，線性關系良好（r>0.991），回收率（88.43±0.16）%～（109.99±2.49）%，日內(nèi)RSD小于4.92%

5、，日間RSD小于6.70%。
　　穩(wěn)定性結果表明，4-ASA-Glu在不同pH值的緩沖液中幾乎不釋放4-ASA，穩(wěn)定性良好。
　　體外結果表明在正常和UC大鼠的胃與小腸的內(nèi)容物溶液中釋藥量均小于8%；在正常盲腸和結腸內(nèi)容物溶液中孵育12 h累積釋放率分別為69%和79%；在模型盲腸和結腸內(nèi)容物溶液中孵育12 h后其分別為55%和74%。
　　體內(nèi)結果顯示4-ASA-Glu12 h內(nèi)在大鼠胃和小腸腔道內(nèi)基本無4-ASA的

6、分布，4-ASA主要分布于大鼠的盲腸和結腸部位。
　　藥效學實驗結果顯示用 TNBS誘導結腸炎后給予柳氮磺胺吡啶（Sulfasalazine， SASP）、4-ASA-Glu、4-氨基水楊酸（4-aminosallcylicacid，4-ASA）、5-氨基水楊酸（5-aminosalicylic acid，5-ASA）后，大鼠炎癥程度明顯減輕。與UC模型組對比，4-ASA-Glu對疾病活動指數(shù)（DAI）評分和病理學改變可明顯改善，