Cyclin X基因克隆及功能初探.pdf

1、細(xì)胞周期蛋白是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程的一類(lèi)重要蛋白質(zhì)，通過(guò)與周期蛋白依賴(lài)性蛋白激酶(cyclin dependent kinase，CDK)結(jié)合而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，具有種屬特異性和組織特異性。我們實(shí)驗(yàn)室通過(guò)EST同源篩選的方法，在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的包含cyclin box的基因，在人的睪丸組織cDNA文庫(kù)中將其克隆，該cDNA序列包含863個(gè)堿基的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)287個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。我們把該序列命名為Cyclin X

2、。組織表達(dá)譜分析表明Cyclin X在睪丸組織中高度表達(dá)，在心臟，肝臟和肺里中度表達(dá)。 為了研究Cyclin X的生理功能，我們選擇以酵母雙雜交的方法篩選互作蛋白為切入點(diǎn)，從人的睪丸cDNA文庫(kù)中篩選到一個(gè)能與Cyclin X互作的蛋白——蛋白激酶C的受體RACK1。體外GST-pull down實(shí)驗(yàn)和熒光共定位實(shí)驗(yàn)表明Cyclin X能與RACK1相互作用。流式細(xì)胞儀對(duì)過(guò)表達(dá)Cyclin X的HEK 293T細(xì)胞內(nèi)DNA含量的