青魚MAVS的克隆及功能初探.pdf

1、MAVS（線粒體抗病毒信號(hào)蛋白）在宿主細(xì)胞抵御微生物病原體的固有免疫應(yīng)答中扮演著一個(gè)重要的角色。在這篇研究中，我們克隆了青魚MAVS的cDNA全長序列，并對MAVS的功能進(jìn)行了初步研究。青魚MAVS全長cDNA由2352個(gè)核苷酸組成，由軟件預(yù)測的MAVS蛋白包含有579個(gè)氨基酸，分子量為62.4kDa，等電點(diǎn)4.83。結(jié)構(gòu)分析顯示青魚MAVS的功能性結(jié)構(gòu)域包括N端CARD結(jié)構(gòu)域（半胱氨酸蛋白酶激活和募集結(jié)構(gòu)域），中間富脯氨酸結(jié)構(gòu)域，假定

2、的TRAF2結(jié)合位點(diǎn)和C端跨膜結(jié)構(gòu)域，這與哺乳動(dòng)物的MAVS相類似。序列比對顯示青魚MAVS與其它已知的魚類和哺乳動(dòng)物的MAVS的CARD結(jié)構(gòu)域有著很高的相似性(53.3％-97.6％)，這也暗示了魚類和哺乳動(dòng)物的MAVS的CARD結(jié)構(gòu)域具有保守性。青魚MAVS在所有選定的組織中都有穩(wěn)定表達(dá)，包括鰓、腎臟、心臟、腸、肝臟、肌肉、皮膚和脾臟;在GCRV和SVCV病毒感染后，腸、肝臟和肌肉組織中的青魚MAVS mRNA水平明顯提高，但是在感

3、染GCRV和SVCV病毒的青魚脾臟中的MAVS轉(zhuǎn)錄水平卻下降了。在免疫印跡分析中，我們檢測出青魚MAVS蛋白在HEK293T細(xì)胞中外源表達(dá)的情況下存在多帶現(xiàn)象，這也與哺乳動(dòng)物的MAVS相類似。免疫熒光分析表明青魚MAVS是一種線粒體蛋白，同時(shí)我們用雙熒光報(bào)告分析發(fā)現(xiàn)在組織培養(yǎng)的情況下青魚MAVS能夠誘導(dǎo)斑馬魚干擾素和EPC干擾素的表達(dá)，接下來的青魚MAVS在EPC細(xì)胞中的抗病實(shí)驗(yàn)也顯示出在過表達(dá)青魚MAVS的情況下，EPC細(xì)胞能有效抵御