miniSTR復合擴增體系的研制與開發(fā).pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文miniSTR復合擴增體系的研制與開發(fā)姓名：白雪申請學位級別：博士專業(yè)：法醫(yī)學指導教師：叢斌20090401中文摘要310／3130基因分析儀對產物進行檢測，Genemapper32軟件分析結果；根據不同引物濃度√M92濃度、不同退火溫度、不同循環(huán)次數下復合擴增的效果對復合體系進行優(yōu)化。⑧根據群體遺傳學研究的結果，應用分子克隆技術構建各基因座等位基因標準分型物，并根據國際法醫(yī)遺傳學會(internationals

2、ocietyofforensicgenetics，ISFG)推薦的命名原則對各等位基因進行命名，同時根據檢測數據進行統(tǒng)計分析編制出miniSTR復合擴增體系的基因分型模版。④對該熒光標記復合擴增體系的靈敏度、種屬特異性、可重復性及對陳舊、腐敗降解檢材DNA的檢測能力進行了研究；用實際案例進行驗證，并與商品化試劑盒進行比較。結果：①成功構建了兩個熒光標記miniSTR復合擴增體系，其中復合體系1包含D10S1248，D2S441，D1S1

3、677和D9S2157四個基因座，復合體系2包含D9S1122，D10S1435，D12ATA63，D2S1776和Amelogenin五個基因座。應用該體系對300份中國漢族無關個體樣本進行檢驗分析，經群體遺傳學計算，該系統(tǒng)的累積個人識別率和非父排除率分別為O99999999228和098547130732。②本實驗構建的兩個復合擴增體系條件易于優(yōu)化，采用國產Taq酶進行擴增，即可得到滿意的擴增產物和分型結果。相對于國外昂貴的試劑盒，

4、它是一種成本低廉但效率高的miniSTR基因座復合擴增體系。③應用分子克隆技術，對9個基因座的64個等位基因進行克隆，經過調整各基因座等位基因的含量，構建出了兩組復合體系的等位基因標準對照體系。根據實驗數據和測序的命名結果設置基因分析命名參數指標，建立了兩個熒光標記miniSTR復合擴增體系的基因分型命名模版，可以對樣本準確分型。④法醫(yī)應用性研究證明該體系具有良好的種屬特異性，除恒河猴在Amelogenin出現(xiàn)色譜峰外，其余8個基因座在

5、8種常見動物中均無特異性產物峰出現(xiàn)；對同一個體的不同組織檢測結果一致；在0125ngDNA模板量的情況下，可對9個基因座進行正確分型；通過對陳舊樣本和降解模型的研究證明，該體系對降解檢材有良好的擴增效果，較常規(guī)大片段STR試劑盒擴增成功率高，可用于常規(guī)試劑盒擴增失敗的降解樣本的分型；通過8個實際案例證明，該體系能用于法醫(yī)學實踐中，結果與鑒定結論一致。結論：本實驗成功的構建了適合中國漢族人群的兩個熒光標記miniSTR復合擴增體系。該熒光