新型豬用復(fù)合益生菌制劑的研制與開發(fā).pdf

1、益生菌制劑以其無毒、無耐藥性、無殘留以及效果顯著、成本低、能有效補充消化道內(nèi)的有益微生物等諸多優(yōu)點，已成為了理想的抗生素替代品而被廣泛應(yīng)用。近來的研究表明，高活菌制劑的功效和安全性，其關(guān)鍵則是生產(chǎn)菌株的選擇;另外多菌種混合劑型的研究也顯得非常重要。
　　 本論文通過從豬的糞便中分離鑒定益生菌，進行乳酸菌耐酸、耐膽鹽試驗與體外抑制致病性大腸桿菌試驗，研究不同復(fù)合益生菌制劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、抗氧化能力、腸道菌群以及免疫功能等的影響

2、，最后研究復(fù)合益生菌制劑的發(fā)酵工藝，對為實現(xiàn)其產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化，推動飼料添加劑產(chǎn)品向高效、無公害的方向發(fā)展，實現(xiàn)畜產(chǎn)品的綠色化具有重要的應(yīng)用意義。各試驗的研究內(nèi)容如下:
　　 試驗1豬源益生乳酸菌的分離鑒定
　　 從健康豬的20份新鮮糞便中分離到一定范圍的乳酸菌共37株。應(yīng)用常規(guī)形態(tài)學、生化鑒定(自動細菌檢測儀)和分子鑒定方法進行鑒定。結(jié)果表明:分離到的37株乳酸菌包括3株嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、5株羅伊氏

3、乳桿菌(L.reuteri)、5株動物乳桿菌(L.animalis)、4株鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、3株腸膜樣明串珠菌(L.mesenteroides)、3株格氏乳球菌(L.garvieae)、3株乳酸乳球菌乳酸亞種(L.subsp.lactis)、2株嗜熱鏈球菌(S.thermophilus)、5株屎腸球菌(E.faeciμm)和4株糞腸球菌(E.faecalis)。這一結(jié)果為新型豬用復(fù)合微生態(tài)制劑的研制與開發(fā)提供了基礎(chǔ)

4、條件。
　　 試驗2豬源乳酸菌耐酸、耐膽鹽試驗與體外抑制致病性大腸桿菌作用研究
　　 對從健康仔豬新鮮糞便分離的12株乳酸菌菌株進行耐酸試驗和耐膽鹽試驗，篩選出4株有效菌株。分別將這4株乳酸菌單獨、混合與K88共培養(yǎng);取4種乳酸菌單獨和混合培養(yǎng)的菌液、發(fā)酵濾液和菌體用牛津杯做K88抑制試驗;分別將培養(yǎng)濾液經(jīng)過乳酸脫氫酶和堿處理做K88抑制試驗。結(jié)果表明:4種乳酸菌皆具有抑菌功能，但相互之間有差異;用乳酸脫氫酶或堿處理后抑

5、菌能力明顯下降，說明乳酸菌是通過產(chǎn)生有機酸尤其是乳酸對K88進行有效抑制。4種菌混合培養(yǎng)的抑菌能力強于單獨培養(yǎng)。
　　 試驗3不同復(fù)合益生菌制劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能及抗氧化能力的影響
　　 為了研究不同復(fù)合益生菌制劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能及抗氧化能力的影響，選取4周齡健康杜×長×大三元雜交斷奶仔豬60頭，隨機分成5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)4頭。A組為飼喂基礎(chǔ)日糧的對照組，B組為飼喂基礎(chǔ)日糧加市售的某公司生產(chǎn)的豬用益生菌制劑組

6、，C、D、E組為基礎(chǔ)日糧分別加3種不同的自制復(fù)合益生菌產(chǎn)品試驗組。試驗結(jié)果表明，添加C組、D組、E組益生菌制劑能顯著改善仔豬的生長性能，提高斷奶仔豬的日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率，其中試驗組C組仔豬日增重與對照組相比提高18.03％(P＜0.05)，料肉比下降了8.86％(P＜0.01)，試驗組D組仔豬日增重提高16.52％(P＜0.05)，料肉比下降了8.12％(P＜0.05)，試驗組E組仔豬日增重提高15.34％(P＜0.05)，料肉比下降

7、了7.75％(P＜0.05);添加C組、D組、E組益生菌制劑能顯著改善仔豬全血中的GSH-PX的活性和血清中SOD的活性，顯著降低血清中的MDA含量，說明提高了斷奶仔豬的抗氧化能力，其中C組、D組效果較好。
　　 試驗4不同復(fù)合益生菌制劑對斷奶仔豬腸道菌群及免疫功能的影響
　　 為了研究益生菌對斷奶仔豬腸道菌群及免疫功能的影響，選取4周齡健康杜×長×大三元雜交斷奶仔豬60頭，隨機分成5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)4頭。A組

8、為飼喂基礎(chǔ)日糧的對照組，B組為飼喂基礎(chǔ)日糧加市售的某公司生產(chǎn)的豬用益生菌制劑組，C、D、E組為基礎(chǔ)日糧分別加3種不同的自制復(fù)合益生菌產(chǎn)品試驗組。試驗結(jié)果表明，添加益生菌的各試驗組糞便中大腸桿菌的含量降低，乳酸菌的含量增加，顯示了其對大腸桿菌等腸道致病菌有良好的抑制作用;在提高動物機體免疫力方面，C組、D組益生菌制劑能促進ConA非特異性刺激外周血液T淋巴細胞的轉(zhuǎn)化，C組、D組T淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平分別提高了20.4％和17.53％(p＜0.

9、05)，C組、D組、E組益生菌制劑還能有效提高仔豬血清中的細胞因子IL-2和TNF-α水平。
　　 試驗5復(fù)合益生菌制劑發(fā)酵條件的優(yōu)化
　　 本實驗通過將4株益生菌單獨和混合培養(yǎng)，測定各株益生菌的活菌數(shù)來評價了4株益生菌的共生關(guān)系;比較了復(fù)合益生菌在YEPD、MRS、麥芽汁和豆面粉培養(yǎng)基上的生長狀況，篩選出了可用于工業(yè)化生產(chǎn)復(fù)合益生菌制劑的培養(yǎng)基;并對該培養(yǎng)基中豆面粉比例作了優(yōu)化，篩選出最佳搭配比例;同時通過單因子試驗和