癌基因Bmi-1的siRNA調控效應及下游靶基因研究.pdf

1、目的：初步探討癌基因Bmi-1的siRNA調控效應及下游靶基因。 方法：針對Bmi-1mRNA編碼區(qū)設計3條siRNA，采用體外化學合成Bmi-1siRNA，經LipofectamineTM2000脂質體分別轉染具有完整Bmi-1-INK4a基因調控通路的K562細胞和缺失INK4a基因的A549細胞，熒光顯微鏡觀察檢測轉染效率，MTT法檢測Bmi-1siRNA轉染后2種細胞的增殖情況，計算有效Bmi-1siRNA作用下2種細

2、胞的IC50，流式細胞儀檢測細胞周期分布，RT-PCR半定量檢測Bmi-1mRNA表達，WesternBlot檢測Bmi-1、P16和hTERT蛋白表達。 結果：(1)轉染6h后，熒光檢測提示2種細胞中轉染效率高達85％；(2)在設計的3條siRNA中，僅Bmi-1siRNA1對2種細胞增殖的抑制作用呈較好的濃度依賴性，但無細胞特異性；(3)Bmi-1siRNA1作用于A549和K562細胞的IC50分別為83.69nmol/

3、l和87.69nmol/l；(4)轉染Bmi-1siRNA1后K562細胞中G1期比例明顯增加而A549細胞中G1期比例變化不明顯；(5)轉染Bmi-1siRNA1后2種細胞倍增時間均顯著延長；(6)轉染24h時，A549和K562細胞中Bmi-1mRNA表達明顯減弱，抑制效率分別為53.88％和58.94％；(7)轉染48h時，A549和K562細胞中Bmi-1蛋白表達均明顯降低，抑制效率分別達到68.86％和70.24％；(8)Bm

4、i-1siRNA1通過上調P16蛋白表達抑制K562細胞體外增殖；(9)在A549細胞中Bmi-1siRNA1可下調hTERT蛋白表達。 結論：(1)LipofectamineTM2000脂質體介導Bmi-1siRNA轉染A549和K562細胞具有轉染效率高、方法簡便等優(yōu)點；(2)Bmi-1siRNA1能顯著抑制A549和K562細胞體外增殖，但無細胞特異性；(3)Bmi-1siRNA1可有效抑制A549和K562細胞中Bmi