Bmi-1基因表達(dá)與人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的關(guān)系探討.pdf

1、背景：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是存在于骨髓中的多能干細(xì)胞，由于其來源方便、擴(kuò)增相對(duì)容易、自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)，且不存在胚胎干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞有可能涉及到的倫理道德問題，因此成為較理想的細(xì)胞治療、基因治療及組織再生的工具，在臨床應(yīng)用上受到越來越廣泛的關(guān)注。目前已用于聯(lián)合造血干細(xì)胞進(jìn)行異基因骨髓移植、糾正某些先天性疾病(如先天性成骨發(fā)育不全)、治療腦血管病和神經(jīng)變性病以及心血管疾病等。

2、由于MSCs在骨髓中存在的數(shù)量少，又缺少特異性表面標(biāo)記，因此在臨床應(yīng)用前必須進(jìn)行擴(kuò)增。但長(zhǎng)期培養(yǎng)過程使MSCs的增殖能力減弱，細(xì)胞變平、增寬，呈現(xiàn)老化征象，使其應(yīng)用受到一定的限制。因此尋找影響MSCs增殖能力的相對(duì)特異基因并探討其作用機(jī)制，將為轉(zhuǎn)基因修飾MSCs以維持細(xì)胞的增殖、盡可能避免腫瘤發(fā)生發(fā)揮重要作用。 干細(xì)胞的增殖受到外部信號(hào)及內(nèi)在遺傳機(jī)制的調(diào)節(jié)。目前對(duì)外部信號(hào)研究較多，(如Notch、Wnt等信號(hào)通路調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞、

3、神經(jīng)干細(xì)胞的自我更新)，而對(duì)內(nèi)在遺傳機(jī)制了解相對(duì)較少，Bmi-1基因是其中一個(gè)為數(shù)不多的已知的干細(xì)胞內(nèi)在調(diào)節(jié)基因，它是Polycomb group家族成員，是維持神經(jīng)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞自我更新及小腦顆粒神經(jīng)元祖細(xì)胞增殖所必須的，通過部分抑制衰老相關(guān)基因來實(shí)現(xiàn)其調(diào)節(jié)功能。它的缺失會(huì)引起神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)異常，腦組織發(fā)育遲滯，神經(jīng)干細(xì)胞的克隆形成率明顯下降，造血干細(xì)胞池明顯減少，表現(xiàn)出自我更新能力的降低。 方法：利用貼壁

4、培養(yǎng)法，分別從5個(gè)非造血系統(tǒng)疾病患者的髂后上棘抽取骨髓并分離培養(yǎng)出hMSCs,并進(jìn)行擴(kuò)增，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型，繪制hMSCs的生長(zhǎng)曲線，取第三代和第九代hMSCs為研究對(duì)象，進(jìn)行SA-β-gal染色，比較老化指標(biāo)SA-β-gal的變化，通過抽提各代次細(xì)胞的RNA，逆轉(zhuǎn)錄PCR定量Bmi-1基因量的變化，分析與細(xì)胞倍增代數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果：我們利用長(zhǎng)期培養(yǎng)的hMSCs，比較第一代、第三代、第六代、第九代、第十二代、第十五代細(xì)胞B