乳腺癌增殖、遷移及治療反應(yīng)相關(guān)因子的研究.pdf

1、乳腺癌是婦女群體中最常見的惡性腫瘤，約占全球女性所有惡性腫瘤的25％。近年來(lái)，通過(guò)對(duì)乳腺癌表面受體分子的研究，乳腺癌被分為管腔型、HER-2陽(yáng)性型和基底型。管腔型乳腺癌有雌激素受體和孕激素受體表達(dá)，但沒(méi)有HER-2表達(dá);HER-2陽(yáng)性型沒(méi)有雌激素受體和孕激素受體表達(dá);基底型則既沒(méi)有雌激素受體和孕激素受體表達(dá)，也沒(méi)有HER-2表達(dá)，也稱為“三陰性乳腺癌”。乳腺癌的預(yù)后與病理分型、內(nèi)分泌受體的表達(dá)以及Her-2表達(dá)等密切相關(guān)。研究乳腺癌細(xì)胞

2、的生物學(xué)特性，對(duì)制定個(gè)性化的治療方案，實(shí)現(xiàn)乳腺癌的精準(zhǔn)治療非常重要。目前，一些有潛在應(yīng)用價(jià)值的分子指標(biāo)在乳腺癌中的作用仍存在分歧，如已經(jīng)被鑒定為細(xì)胞增殖的高效分子標(biāo)記物的Ki-67。Ki-67是一個(gè)和細(xì)胞增殖相關(guān)的細(xì)胞核抗原，會(huì)在除了G0時(shí)期以外的其他所有細(xì)胞周期表達(dá)。有研究表明，Ki-67增殖活性和腫瘤分化、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后是相關(guān)的。然而，關(guān)于Ki-67的表達(dá)與管腔型乳腺癌臨床關(guān)系的相關(guān)研究仍有爭(zhēng)議。
　　鑒于上述原因，本研究的

3、第一項(xiàng)工作探討了Ki-67在管腔型乳腺癌患者中的表達(dá)情況及其與臨床病理資料的關(guān)系。該研究中一共有62例管腔型乳腺癌患者入選，對(duì)照組為年齡相仿的單純?nèi)橄僭錾幕颊?。通過(guò)熒光定量PCR的方法檢測(cè)Ki-67的表達(dá)水平。和對(duì)照相比，Ki-67在乳腺癌病人的腫瘤組織中的表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。乳腺癌腫瘤組織中Ki-67的mRNA水平也顯著高與其在癌旁組織中的水平(P＜0.05)。此外，在乳腺癌中，高表達(dá)的Ki-67和腫瘤臨床分期、腫瘤大小、

4、淋巴轉(zhuǎn)移都正相關(guān)(P＜0.05)。在降低了Ki-67表達(dá)水平的MCF-7細(xì)胞中，癌細(xì)胞的增殖活性和遷移都降低了(P＜0.05)。結(jié)果表明Ki-67可以通過(guò)影響癌細(xì)胞的增殖和遷移從而起到促進(jìn)乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的作用。
　　我們又進(jìn)一步研究了谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶多態(tài)性對(duì)乳腺癌預(yù)后的影響。我們采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法，對(duì)GSTM1，GSTT1和GSTP1的Ⅱe105Val多態(tài)性基因型進(jìn)行了分析。結(jié)果表明GSTP1Ⅱe1

5、05Val的GG基因型相對(duì)于野生型基因型對(duì)化療有更好的反應(yīng)及更長(zhǎng)的生存期。
　　進(jìn)一步，我們針對(duì)乳腺癌治療反應(yīng)相關(guān)因素開展了基礎(chǔ)研究，我們發(fā)現(xiàn)HER-2和TOP2A基因的表達(dá)影響乳腺癌的放射敏感性。為了探討HER-2和TOP2A基因?qū)θ橄侔┓派涿舾行缘挠绊?，我們分別構(gòu)建表達(dá)HER-2或TOP2AshRNA的重組質(zhì)粒，并使用lipofectamine2000將其轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞SK-Br-3中，敲降HER-2和TOP2A的基因表達(dá)。

6、轉(zhuǎn)染2天后利用蛋白印跡檢測(cè)干擾效果，利用流式細(xì)胞儀和MTT法分別檢測(cè)放射處理后細(xì)胞凋亡和增殖相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2、Ki-67的表達(dá)變化，并采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)放射敏感性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞SK-Br-3中敲降HER-2和TOP2A的表達(dá)，經(jīng)放射處理后Caspase-3表達(dá)升高，Bcl-2表達(dá)降低，細(xì)胞增殖標(biāo)志蛋白Ki-67表達(dá)降低，提示乳腺癌細(xì)胞凋亡率升高，增殖率降低。同時(shí)敲降HER-2和TOP2A兩個(gè)基因可促進(jìn)凋