自噬對(duì)炎性微環(huán)境下ATDC5細(xì)胞軟骨表型表達(dá)的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 IL-1β對(duì)ATDC5細(xì)胞增殖、軟骨表型及自噬的影響
　　目的：探討白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）模擬炎性微環(huán)境下對(duì)軟骨細(xì)胞株ATDC5細(xì)胞增殖及軟骨表型的影響，以及自噬、凋亡作用。
　　方法：體外培養(yǎng)ATDC5細(xì)胞，以不同濃度IL-1β（0、10、20、30、40、60ng/ml）刺激48h和同一濃度（30ng/ml）IL-1β刺激不同時(shí)間（0、6、12、24、36、4

2、8、72h）；采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況、轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、Western bolt檢測(cè)軟骨相關(guān)指標(biāo)Col2a、Sox9及自噬相關(guān)指標(biāo)LC3、Beclin-1的mRNA和蛋白水平。
　　結(jié)果：CCK-8檢測(cè)顯示IL-1β可顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖，并具有時(shí)間依賴(lài)性；在IL-1β作用下ATDC5細(xì)胞軟骨指標(biāo)Col2a和Sox9表達(dá)下調(diào)，而自噬相關(guān)指標(biāo)LC3和Beclin-1表達(dá)上調(diào)，并于24h時(shí)達(dá)到最高值。

3、　　結(jié)論：在炎性環(huán)境中，不利于ATDC5表達(dá)軟骨指標(biāo)，而在干預(yù)早期(24h)發(fā)生的自噬現(xiàn)象能促進(jìn)AT D C5細(xì)胞軟骨指標(biāo)的表達(dá)。
　　第二部分 Wnt/β-catenin通路與NF-κB通路共調(diào)節(jié)在炎性環(huán)境下ATDC5細(xì)胞軟骨表型表達(dá)的作用
　　目的：探討Wnt通路調(diào)控對(duì)炎性環(huán)境下ATDC5細(xì)胞軟骨表型表達(dá)的影響，分析Wnt通路和 NF-κB通路的相互作用關(guān)系，為維持炎性環(huán)境下軟骨表型和臨床治療關(guān)節(jié)軟骨損傷提供一種可行方案

4、
　　方法:體外培養(yǎng)ATDC5細(xì)胞，以不同濃度IL-1β（0、10、20、30、40、60ng/ml）、不同濃度LiCl（0、3、6、12、18、24mM）刺激48h以及第一組予LiCl（6、12mM）刺激，第二組予IL-1β30 ng/ml刺激，第三組予IL-1β30 ng/ml并LiCl（6、12mM）同時(shí)刺激，以正常培養(yǎng)組為空白對(duì)照分別培養(yǎng)48h；采用轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、Western bolt檢測(cè)軟骨相關(guān)

5、指標(biāo)Col2a、Sox9的mRNA和蛋白水平及Western bolt檢測(cè)Wnt/β-catenin通路與NF-κB通路相關(guān)基因的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:IL-1β組軟骨相關(guān)指標(biāo)Col2a、Sox9表達(dá)減弱而LiCl組表達(dá)升高，Western bolt結(jié)果顯示IL-1β+LiCl組較單純IL-1β組NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)升高而β-catenin蛋白表達(dá)減弱，且磷酸化β-catenin蛋白表達(dá)稍增高，c-myc、GSK-3β及其磷