綠原酸對(duì)缺氧環(huán)境下干細(xì)胞來源軟骨樣細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　 軟骨細(xì)胞是構(gòu)成關(guān)節(jié)軟骨的主要基礎(chǔ),但因其高度分化增殖能力低下造成軟骨的再生能力差,使得軟骨損傷后難以自然修復(fù)。干細(xì)胞及其來源軟骨細(xì)胞移植治療解決了軟骨細(xì)胞低增殖力問題,已成為臨床上治療軟骨損傷的有效方法[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)體外常氧環(huán)境下培養(yǎng)的細(xì)胞移植進(jìn)入類似關(guān)節(jié)腔內(nèi)缺氧環(huán)境[2]后活性及存活率均下降[3、4],Wakitani[5]等研究中認(rèn)為移植細(xì)胞低存活率使得干細(xì)胞分化的軟骨的厚度、機(jī)械強(qiáng)度等均不及正

2、常軟骨,所以認(rèn)為細(xì)胞移植的低存活率是制約這一方法應(yīng)用的因素。綠原酸(chlorogenic acid,CGA)為苯丙素類極性有機(jī)酸,具有強(qiáng)抗氧化能力可抑制氧化應(yīng)急引起的凋亡[6]。綠原酸對(duì)缺氧環(huán)境下細(xì)胞內(nèi)活性氧改變引起的凋亡的作用,目前還不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞為軟骨樣細(xì)胞,0.1％O2缺氧環(huán)境下模擬關(guān)節(jié)腔內(nèi)的缺氧環(huán)境模型,觀察綠缺氧環(huán)境下原酸對(duì)軟骨樣細(xì)胞的作用,探討其對(duì)軟骨細(xì)胞的影響及可能機(jī)制。
　　 研究?jī)?nèi)容和

3、方法:
　　 采用體外培養(yǎng)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞,以含0.2mg·L-1 BMP-2的DMEM誘導(dǎo)誘導(dǎo)液培養(yǎng)12天使其成為軟骨樣細(xì)胞后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為(A)正常對(duì)照組；(B)綠原酸組;(C)0.1％O2缺氧環(huán)境組；(D)綠原酸+0.1％O2缺氧環(huán)境組。進(jìn)而檢測(cè)各組Hoechst33258熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞內(nèi)活性氧水平;RT—PCR檢測(cè)不同組軟骨細(xì)胞Caspase-3和Bcl-2基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 與

4、正常對(duì)照組比較,0.1％O2缺氧環(huán)境12小時(shí)能明顯造成干細(xì)胞來源軟骨樣細(xì)胞的凋亡(P<0.05),綠原酸可降低0.1％O2缺氧引起的軟骨樣細(xì)胞凋亡率(P<0.05),活性氧水平下降,Bcl—2表達(dá)增強(qiáng),Caspase-3表達(dá)減弱。
　　 結(jié)論:
　　 綠原酸可抑制0.1％O2缺氧引起的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,其作用機(jī)制可能與降低細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平,穩(wěn)定細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)來保護(hù)線粒體膜電位,促進(jìn)凋亡抑制基因Bcl-2的表達(dá)及抑制Ca