人脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞對順鉑介導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞凋亡作用的影響.pdf

1、目的：
　　細(xì)胞水平上研究人脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞（AD-MSCs，Adipose-derived mesenchymal stem cells）影響順鉑介導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞的凋亡作用及其作用機(jī)制。
　　材料和方法：
　　1.原代培養(yǎng)AD-MSCs，留取2-3天培養(yǎng)基上清作為條件培養(yǎng)基。條件培養(yǎng)基培養(yǎng)10天后的上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3和ES2作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行后續(xù)檢測，常規(guī)培養(yǎng)基中的腫瘤細(xì)胞作為對照組。
　　2.

2、 MTT法檢測順鉑對AD-MSCs處理前后的上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3和ES2的毒性變化，計(jì)算IC50值。
　　3.分別用 Hoechst33342熒光染色法、Annexin V-FITC流式細(xì)胞術(shù)、Western Blotting檢測經(jīng)一定濃度順鉑作用48h后的卵巢癌細(xì)胞SKOV3和ES2中凋亡小體、凋亡率以及活化的caspase-3片段的表達(dá)來研究AD-MSCs對順鉑介導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞的凋亡作用。
　　4.原子光譜吸

3、收法檢測經(jīng)AD-MSCs處理前后的上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3和ES2內(nèi)鉑蓄積的變化。
　　結(jié)果：
　　1. MTT實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)AD-MSCs刺激后的上皮性卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感性降低。實(shí)驗(yàn)組中 ES2和 SKOV3的IC50值從對照組的14.82±0.98μmo l/L和29.06±4.29μmol/L分別增加至23.70±0.97μmol/L（PES2=0.004）和49.80±4.51μmol/L（PSkov3=0.002

4、）。
　　2.經(jīng)順鉑作用后的實(shí)驗(yàn)組卵巢癌細(xì)胞中，Hoec hs t33342熒光染色法結(jié)果顯示凋亡小體的形成少于對照組；Anne xin V-FITC流式細(xì)胞術(shù)中測定的ES2和SKOV3細(xì)胞凋亡率較對照組下降1.9倍（P=0.019）和2.33倍（P=0.04），且以早期凋亡為主；Western blotting結(jié)果顯示caspase-3活化片段的的表達(dá)少于對照組。AD-MSCs條件培養(yǎng)基可以增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對順鉑的凋亡抗性。