光甘草定提取純化及抗銀屑病作用和機理研究.pdf

1、銀屑病由多基因遺傳、多環(huán)境因素刺激誘導的免疫異常性炎癥性增生性皮膚病，主要表現(xiàn)IL-23/IL17炎癥反應軸上相關因子的調(diào)節(jié)。市場上多數(shù)治療銀屑病的藥物如糖皮質(zhì)激素、維生素A衍生物、水楊酸、喜樹堿、雷公藤內(nèi)酯等，長期使用對機體肝、腎和免疫功能有嚴重損壞作用。近年學者提出：“中醫(yī)與中西醫(yī)結合是防治牛皮癬（銀屑病）的方向”。光甘草定是從甘草植物提取出的天然產(chǎn)物，已有百年的藥用歷史，在抗炎抗氧化和治療痤瘡等方面有廣泛的應用，此外，光甘草定長期

2、作為護膚品成分，本文以探索光甘草定在治療銀屑病的方面的作用和機理研究為重點。具體研究內(nèi)容和結果如下：
　　1）光甘草定的分離純化及結構鑒定。本文采取用乙酸乙酯回流2h，料液比為1:10的提取方法，通過兩次層析分離，最后用半制備液相得到光甘草定純品。通過高效液相和核磁共振進行純度及結構確認。建立高效液相快速檢測光甘草定含量方法。
　　2）光甘草定的抗銀屑病活性研究。首先建立咪喹莫特乳劑（IMQ）誘導的小鼠銀屑病耳廓腫脹模型和背

3、部皮膚破損模型。其次，根據(jù)光甘草定（PT）在人體皮膚用藥標準設置不同濃度進行給藥。1）對小鼠耳廓紅腫程度的進行表觀觀察以及打孔稱重后發(fā)現(xiàn)，在PT（30g/kg、15g/kg）時明顯抑制效果，抑制率高達68.37％和56.98%。2）對小鼠背部皮膚紅腫、鱗屑、腫脹程度的進行PAIS評分，繪制趨勢線以觀察各組小鼠皮損的變化情況，發(fā)現(xiàn)PT（30g/kg、15g/kg）組小鼠具有明顯的抑制效果。最后，針對上述結果采用了 HE染色方法從組織形態(tài)方

4、面觀察組織腫脹和損傷作用，研究發(fā)現(xiàn)，正常組的耳朵和背部皮膚的組織形態(tài)表現(xiàn)正常；單獨使用IMQ時，小鼠耳朵和背部皮膚角質(zhì)層明顯增厚和炎性細胞浸潤增多（細胞固縮）；FK組和PT組組均有一定的抑制作用，通過對比發(fā)現(xiàn)PT（30g/kg、15g/kg）組小鼠的耳朵和背部皮膚切片的變化更明顯，包括耳朵和皮膚腫脹程度明顯降低（趨于正常組）以及細胞核與細胞質(zhì)的比例明顯變小等，活性優(yōu)于陽性藥。
　?。?）光甘草定的抗銀屑病機理研究。收集上述的小鼠銀

5、屑病組織樣品，提取蛋白和轉錄基因。通過熒光定量PCR（RTF-QPCR）和免疫組織化學法（IHC）檢測組織中各目標因子的表達情況。實驗結果發(fā)現(xiàn)，IMQ單獨使用時小鼠皮膚中的P65、IFN-γ、IL-17A、IL-6、COX-2、IL-22、IL-23、CD4、CD8?的表達量明顯的增加，各PT組對這些炎癥介質(zhì)均有一定程度的抑制效果，其中高濃度30g/kg組的抑制作用最強，并且比陽性藥好。由此可見，光甘草定是通過抑制上IL-23/IL17