酪蛋白激酶(CK2)和人造血相關(guān)的PBX相互作用蛋白質(zhì)(HPIP)在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及分析.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過對不同級別人腦膠質(zhì)瘤組織及正常腦組織中的酪蛋白激酶CK2及人造血相關(guān)的PBX相互作用蛋白HPIIP表達(dá)含量的測定，探討人腦膠質(zhì)瘤中酪蛋白激酶CK2和人造血相關(guān)的PBX相互作用蛋白HPIP在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)意義及兩者的相關(guān)性。
　　方法：收集自2014年4月到2015年9月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本64例，已取得病例標(biāo)本病理診斷明確，由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科有經(jīng)驗(yàn)或高年資主任醫(yī)師按照 WHO腦

2、腫瘤分級診斷標(biāo)準(zhǔn)完成，其中I級人腦膠質(zhì)瘤9例，II級人腦膠質(zhì)瘤17例，III級人腦膠質(zhì)瘤18例，IV級人腦膠質(zhì)瘤11例。正常腦組織的病理標(biāo)本均來自因顱腦外傷或顱內(nèi)出血病患需要行內(nèi)減壓術(shù)所取的腦組織標(biāo)本，共取13例作為對照組。本次實(shí)驗(yàn)研究所收集的人腦膠質(zhì)瘤病理診斷，均為首診，在手術(shù)前均未采取任何放療及化療等抗腫瘤治療措施。所有實(shí)驗(yàn)用的標(biāo)本，均是手術(shù)中切除病理組織標(biāo)本后，快速取材，分別以10％的福爾馬林液和-80度液氮保存待用。所取標(biāo)本分為

3、以下五組：正常腦組織組，I級膠質(zhì)瘤組，II級膠質(zhì)瘤組，III級膠質(zhì)瘤組，IV級膠質(zhì)瘤組。其中低級別膠質(zhì)瘤 I～I(xiàn)I級，高級別膠質(zhì)瘤III～I(xiàn)V級。采用免疫組織化學(xué)方法IHC分別檢測CK2和HPIP在上述病理組織切片中的表達(dá)，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0分析，免疫熒光法檢測CK2和HPIP在同一病理切片內(nèi)表達(dá)情況，分析其表達(dá)特點(diǎn)。應(yīng)用Western Blot方法同測定上述每組標(biāo)本CK2和HPIP的蛋白印跡情況，應(yīng)用相關(guān)軟件Quantity

4、 One分別檢測各條帶的灰度值，根據(jù)灰度值在應(yīng)用SPSS19.0軟件中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后得出結(jié)論。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組織化學(xué)IHC檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)描述，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)符合正態(tài)性檢驗(yàn)以（x±s%）表示，得知：HPIP在正常腦組織，低級別人腦膠質(zhì)瘤I～I(xiàn)I級，陽性率分別為6.98±4.604%、25.54±20.093%、53.32±23.630%。而在高級別人腦膠質(zhì)瘤III～I(xiàn)V級，表達(dá)陽性率分別達(dá)到73.69±15.539%、82

5、.79±16.246%，可見隨著腫瘤惡性程度不斷增高，HPIP表達(dá)量不斷增加，單因素方差分析（One-way ANOVA）結(jié)果統(tǒng)計(jì)量為14.736，P<0.01，Pearson等級相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)r=0.779，P<0.01，HPIP表達(dá)與腫瘤分級有關(guān)。腫瘤惡性程度分級越高，HPIP表達(dá)陽性率隨之越高，圖片見：Fig1～5。統(tǒng)計(jì)圖表詳見Table1、Table2。CK2正常腦組織，低級別人腦膠質(zhì)瘤I～I(xiàn)I級，陽性率分別為8.97±

6、8.379%、28.70±19.848%、45.75±24.881%。高級別人腦膠質(zhì)瘤III～I(xiàn)V級表達(dá)陽性率分別為66.50±18.170%、76.67±16.887%，可得出隨著腫瘤惡性程度增高，CK2表達(dá)量增加。單因素方差分析（One-way ANOVA）結(jié)果統(tǒng)計(jì)量為9.680 P<0.01，Pearson等級相關(guān)分析得出相關(guān)系數(shù)r=0.712，P<0.01，CK2表達(dá)可與腫瘤分級呈正相關(guān)：CK2隨著腫瘤分級升高，而表達(dá)陽性率越高

7、。圖片見Fig.6~10、Table3、Table4。針對 HPIP與CK2的表達(dá)情況進(jìn)行了相關(guān)性分析。Pearson等級相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)為r=0.922，P<0.01，即HPIP表達(dá)與CK2表達(dá)呈高度相關(guān)：隨著HPIP表達(dá)陽性率等級越高，CK2表達(dá)陽性率等級亦越高，詳見Table5。
　　2、免疫熒光結(jié)果分析得知；觀察兩種因子在同一病理組織標(biāo)本中的分布情況?？梢娋G色熒光是CK2因子，而紅色熒光是HPIP因子，細(xì)胞核顯示為藍(lán)

8、色熒光。同一病理組織切片中兩種蛋白，分布表達(dá)共同定位在細(xì)胞核。詳見Fig11、Fig12、Fig13。
　　3、Western blot結(jié)果顯示：采用此方法對各組織標(biāo)本的蛋白含量進(jìn)行測定。觀察CK2、HPIP兩種蛋白，分別在正常腦組織對照組，低級別人腦膠質(zhì)瘤 I～I(xiàn)I級、高級別人腦膠質(zhì)瘤 III～I(xiàn)V級的蛋白表達(dá)情況，檢測結(jié)果以測定的灰度值為標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算方法為目的條帶與GAPDH光密度的比值作為蛋白的相對表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)10遍，分析

9、HPIP、CK2的相對表達(dá)量，HPIP的相對表達(dá)量逐漸升高，CK2的相對表達(dá)量逐漸增高。各級別人腦膠質(zhì)瘤組分別與正常腦組織組內(nèi)比較，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差SD表示，P<0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Pearson等級相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)為r=0.926，P<0.01，即隨著HPIP相對表達(dá)量升高，而CK2相對表達(dá)量升高。詳見Table6、Table7、Fig.14、Fig.15、Fig.16、

10、Fig.17、Fig.18、Fig.19。
　　結(jié)論：
　　1、CK2與HPIP在正常腦組織均呈陽性表達(dá)，在不同級別人腦膠質(zhì)瘤都呈過表達(dá)。正常腦組織，低級別人腦膠質(zhì)瘤I~II級，高級別人腦膠質(zhì)瘤III～I(xiàn)V級三組之間以及兩兩組間的表達(dá)比較，均存在顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著人腦膠質(zhì)瘤的惡性級別增高，CK2與HPIP表達(dá)量逐漸增高。表明在人腦膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程中，CK2與HPIP可能具有重要的作用，與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度可能具有一定關(guān)