婦科實寒證模型大鼠T-PA-PAI-1的變化及加減溫經(jīng)湯的干預作用.pdf

1、目的:觀察婦科實寒證模型大鼠血清及卵巢組織中t-PA、PAI-1的變化及其與生殖內(nèi)分泌激素的關(guān)系，探討婦科實寒證的發(fā)生與纖溶功能的關(guān)系，并采用加減溫經(jīng)湯進行干預，探討加減溫經(jīng)湯對婦科實寒證模型大鼠生殖功能的影響。
　　方法:選用健康清潔級SD雌性大鼠60只，2月齡，體重200±20g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機將其分為正常組、模型組、治療組三組，每組20只。采用冰水冷凍的方法制備婦科實寒證動物模型。自造模第1天開始，治療組大鼠按3.51

2、g/200g/天的給藥標準給予加減溫經(jīng)湯灌胃，1次/日，連續(xù)2周。其它兩組給予同體積的蒸餾水灌胃。2周后選擇動情間期斷頭處死大鼠。取血，離心，分離血清，采用放射免疫分析法測定血清E2、P、T、FSH、LH的含量;采用雙抗體夾心的ABC-ELISA法檢測血清t-PA、PAI-1的水平。迅速剖取卵巢，剔除周圍組織，右側(cè)卵巢組織放置4％多聚甲醛固定，酒精脫水，二甲苯透明，包埋，5μm切片，HE染色，光鏡下觀察卵巢組織形態(tài)學變化。左側(cè)卵巢組織置

3、于標記的塑料冷凍管內(nèi)，采用Western Blood方法檢測卵巢組織中t-PA、PAI-1的蛋白表達，采用RT-PCR技術(shù)檢測t-PA mRNA、PAI-1 mRNA表達。
　　結(jié)果:
　　1、一般情況
　　模型組大鼠受凍后出現(xiàn)寒戰(zhàn)、被毛無光、喜扎堆、蜷縮少動、反應(yīng)遲鈍、爪尾及耳緣皮膚顏色紫暗以及大便稀爛等癥狀。治療組上述癥狀均有明顯改善。
　　2、動情周期
　　正常組:陰道涂片顯示動情周期為100±6.6

4、4 h，動情間期31.2±11.2h。具有明顯的規(guī)律性、周期性變化。模型組:動情周期為115±8.29 h，動情間期50.4±8.64 h，與正常組相比，動情周期明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），動情間期延長，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。治療組:動情周期為107±8.18h，動情間期為39.6±8.16h。與模型組比較，動情周期變短，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，動情間期變短，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

5、>　　3、血清生殖激素含量的變化
　　與正常組相比，模型組血清E2、P、FSH、LH、T水平下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組血清E2、P、FSH、LH、T水平上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與正常組相比，治療組E2、P、FSH、LH、T稍有降低，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4、卵巢形態(tài)學改變
　　正常組大鼠卵巢形態(tài)正常，各期卵泡均可見;模型組卵巢卵泡數(shù)量減少，成熟卵泡罕見

6、，血管管腔狹細;治療組以上指標有明顯改善。
　　5、血漿t-PA、PAI-1含量的測定
　　與正常組相比，模型組血漿t-PA水平降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組血漿t-PA水平上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與正常組相比，治療組血漿t-PA水平稍低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　與正常組相比，模型組血漿PAI-1水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療

7、組血漿PAI-1水平下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與正常組相比，治療組血漿PAI-1水平上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　6、卵巢組織t-PA、PAI-1蛋白表達的變化
　　與正常組相比，模型組大鼠卵巢組織t-PA表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組大鼠卵巢組織t-PA表達增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與正常組相比，治療組大鼠卵巢組織t-PA表達稍低，差異無統(tǒng)計學意

8、義(P＞0.05)。
　　與正常組相比，模型組大鼠卵巢組織PAI-1表達升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組大鼠卵巢組織PAI-1表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;與正常組相比，治療組大鼠卵巢組織PAI-1表達增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　7卵巢組織t-PA mRNA、PAI-1 mRNA的變化
　　與正常組相比，模型組大鼠卵巢組織t-PA mRNA表達降低，差異有統(tǒng)計

9、學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組大鼠卵巢組織t-PA mRNA表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與正常組相比，治療組大鼠卵巢組織t-PA mRNA表達較低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　與正常組相比，模型組大鼠卵巢組織PAI-1 mRNA表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組相比，治療組大鼠卵巢組織PAI-1mRNA表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與正常組相比，治療組大鼠卵

10、巢組織PAI-1 mRNA表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1婦科實寒證模型大鼠存在生殖內(nèi)分泌紊亂及卵巢功能障礙
　　2婦科實寒證模型大鼠存在全身和卵巢局部纖溶功能異常，使血流受阻，引起卵巢血供障礙而影響卵巢功能。提示婦科寒證的發(fā)生與全身及卵巢組織局部纖溶功能低下密切相關(guān)。其機制可與t-PA、PAI-1的異常表達引起卵巢新生血管抑制和功能障礙相關(guān)，此有待進一步證實。
　　3加減溫經(jīng)湯能