擴(kuò)張型心肌病猝死者心肌MMP-9表達(dá)的觀察.pdf

1、【研究背景】
　　 心臟性猝死在法醫(yī)病理學(xué)研究中占有重要地位。擴(kuò)張型心肌?。―ilated Cardiomyopathy，DCM），亦稱充血性心臟病，是目前心臟性猝死發(fā)生的重要病因之一，占心肌病猝死發(fā)生率約50％，其發(fā)病年齡多在20-50歲之間，嚴(yán)重威脅著人類健康。DCM在臨床上主要表現(xiàn)為不明原因的心衰，隨著病情的進(jìn)展可出現(xiàn)心悸、乏力、胸悶、水腫，呼吸急促、甚至呼吸困難等癥狀。由于其臨床表現(xiàn)無特異性，導(dǎo)致該病在診斷上與冠心病或其

2、他心臟疾?。ㄈ缛毖孕募〔。↖CM））較難區(qū)別[1]。
　　 既往的研究認(rèn)為，DCM是由病毒性心肌炎發(fā)展而來的[2-3]，自身免疫功能紊亂與病毒感染是擴(kuò)張型心肌病發(fā)病的主要原因。在病理形態(tài)學(xué)上DCM主要表現(xiàn)為心臟體積增大，重量增加，達(dá)500～800g，甚至更重（診斷標(biāo)準(zhǔn)：男性＞350g，女性＞300g）[4]，左、右心房及左、右心室擴(kuò)張，有的心室壁略厚或者正常（離心性肥大），心尖部室壁常呈鈍圓形，二尖瓣和三尖瓣可因心室擴(kuò)張導(dǎo)致關(guān)

3、閉不全，雙側(cè)心內(nèi)膜可見增厚、瘢痕形成等。
　　 在法醫(yī)病理學(xué)檢案實(shí)踐中，DCM猝死案例并非少見，其診斷主要以心臟形態(tài)學(xué)改變?yōu)橐罁?jù)，在經(jīng)全面系統(tǒng)的解剖，排除機(jī)械性損傷、窒息和其他原因引起的猝死情況下診斷。但仍有部分案例，其心臟重量改變不明顯（300～400g），心室壁略厚或者正常，心臟形態(tài)學(xué)改變特異性不強(qiáng)，但卻表現(xiàn)為心房、心室擴(kuò)張，由于缺乏明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)排除其他死因后診斷為DCM猝死，易使人產(chǎn)生死因不明、機(jī)理不清的疑問而引起糾

4、紛。大量研究證實(shí)，心肌纖維化是DCM發(fā)展到一定階段的病理改變，心肌纖維化持續(xù)發(fā)展會(huì)導(dǎo)致心肌重構(gòu)，最終因心臟收縮功能障礙導(dǎo)致急性呼吸循環(huán)功能衰竭而發(fā)生猝死。因此探明心肌纖維化的形成機(jī)制是DCM研究中的重要課題之一。
　　 心肌纖維化的形成機(jī)制較為復(fù)雜，有眾多分子機(jī)制參與膠原的代謝及降解，目前比較明確的有AngⅡ-BK系統(tǒng)、ET-NO系統(tǒng)、血小板衍生生長因子（PDGF）和血栓素（TXA2）-PGI2系統(tǒng)[5-7]。另外有研究報(bào)道，D

5、CM心肌纖維化的發(fā)生、發(fā)展與TGF-β1信號通路所介導(dǎo)的MMPs的異常表達(dá)有關(guān)。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)（Matrix Metalloproteinases，MMPs）目前已經(jīng)分離鑒別出26個(gè)成員，編號MMPs1-26，因其激活過程中對金屬離子有較高的依賴性而得名。MMPs-9是基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族中重要成員之一，主要參與降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原（心肌間質(zhì)的主要成份）及明膠，而膠原纖維合成及代謝失調(diào)是導(dǎo)致心肌纖維

6、化的主要原因，心肌間質(zhì)纖維化又是導(dǎo)致DCM患者心功能下降，心室重構(gòu)的最終原因[8]，因此MMP-9與DCM猝死之間存在著一定的聯(lián)系。本研究從法醫(yī)病理學(xué)的角度出發(fā)，通過觀察DCM猝死者與其他原因死亡者之間心肌纖維化改變程度與MMP-9表達(dá)之間的差異，對MMP-9與心肌間質(zhì)纖維化、心室重構(gòu)及DCM猝死之間是否存在關(guān)聯(lián)及關(guān)聯(lián)程度大小進(jìn)行分析，旨在為DCM猝死的法醫(yī)病理學(xué)診斷提供參考依據(jù)。
　　 【目的】
　　 應(yīng)用Masson

7、染色及MMP-9免疫組織化學(xué)染色技術(shù)對所篩選出的心臟標(biāo)本進(jìn)行染色，對DCM猝死者和對照組心肌纖維化程度及MMP-9表達(dá)情況進(jìn)行觀察比較，旨在為DCM猝死案例的法醫(yī)病理學(xué)診斷提供參考依據(jù)。
　　 【材料與方法】
　　 從華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系法醫(yī)病理教研室2003－2009年尸檢案例中，根據(jù)不同死因診斷篩選出2個(gè)組，即實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組7例，入選標(biāo)準(zhǔn)為第一死因診斷為DCM猝死案例；對照組21例，又分為冠心病猝死

8、組、一氧化碳中毒死亡組和損傷死亡組，每組各7例，入選標(biāo)準(zhǔn)為死因診斷明確，無死因競爭案例。
　　 對所有心臟標(biāo)本常規(guī)取材、制片，HE染色，顯微鏡下觀察是否有以下病理形態(tài)學(xué)改變：心肌纖維肥大，心肌間質(zhì)纖維化，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤等。
　　 常規(guī)取材、制片，Masson三色染色，觀察心肌間質(zhì)膠原纖維成分。
　　 免疫組織化學(xué)染色觀察MMP-9表達(dá)情況。
　　 Masson染色及MMP-9免疫組化染色后的切片，經(jīng)顯微鏡

9、下拍照后進(jìn)行圖像分析，分別計(jì)算出其平均光密度（Average Optical Density，AOD）及面密度（Area Density，AD）值，所得數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 【結(jié)果】
　　 1．HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組7例均檢見心肌纖維肥大∕萎縮及心肌間質(zhì)明顯纖維化，4例檢見心肌間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤，其中1例見心肌纖維空泡變性。各對照組中僅冠心病組見心肌纖維肥大，左心室及乳頭肌纖維組織輕度增生，一

10、氧化碳中毒死亡組和損傷死亡組各1例見心肌肥大及少量纖維組織增生。實(shí)驗(yàn)組及各對照組HE染色觀察結(jié)果比較見表 2。
　　 2．Masson染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組心肌間質(zhì)內(nèi)均呈現(xiàn)明顯的藍(lán)染（示膠原纖維增多），對照組中冠心病猝死組見一定程度的藍(lán)染，但與實(shí)驗(yàn)組相比程度較低。一氧化碳中毒死亡組和損傷死亡組心肌間質(zhì)內(nèi)僅在血管周圍呈現(xiàn)小范圍的藍(lán)染或者無藍(lán)染，兩組間染色強(qiáng)度及面積經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，存在顯著性差異（P﹤0.05）。
　　 3．MMP-

11、9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組心肌纖維胞漿中均發(fā)現(xiàn)不同程度的棕黃色顆粒（陽性），對照組中冠心病猝死組僅個(gè)別心肌纖維胞漿中呈現(xiàn)棕黃色顆粒，一氧化碳中毒死亡組和損傷死亡組僅1例心肌胞漿呈現(xiàn)著色較淺的棕黃色顆粒。對所得陽性產(chǎn)物的AOD及AD值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)組與各對照組之間均存在顯著性差異（P﹤0.05）。
　　 4．實(shí)驗(yàn)組Masson染色和MMP-9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的AOD及AD值進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，MMP-9的表達(dá)量與Mas

12、son陽性產(chǎn)物的AOD及AD值存在顯著正相關(guān)關(guān)系（r分別為0.745、0.638，P﹤0.05）。提示DCM猝死者心肌中MMP-9過表達(dá)可導(dǎo)致心肌膠原纖維的過度沉積。
　　 【結(jié)論】
　　 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：DCM猝死者心肌纖維存在明顯的肥大∕萎縮及纖維化，且與對照組存在顯著性差異；DCM猝死者心肌纖維化的發(fā)生可能與MMP-9的過表達(dá)有關(guān)；在常規(guī)HE染色觀察基礎(chǔ)上，應(yīng)用Masson染色及MMP-9免疫組織化學(xué)染色對DCM猝