關(guān)于阻斷SDF-1-CXCR4信號通路在減緩骨性關(guān)節(jié)炎進展中的研究.pdf

1、目的：
　　探索研究通過使用藥物AMD3100阻斷基質(zhì)細胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）/趨化因子受體4信號通路在豚鼠骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis, A）中的作用。
　　方法：
　?。?）實驗動物的選擇：本試驗選取35只九個月大的雄性Hartley豚鼠（0.88公斤±0.21公斤），將其隨機分為三組：第1組通過滲透微泵連續(xù)輸注CXCR4拮抗劑AMD31

2、00/PBS溶液（N=13）；第2組主要作為未處理的OA控制組（N=11）；第3組通過滲透微泵持續(xù)輸注PBS溶液（n=11）。豚鼠使用含有0.2％甲苯噻嗪和1%氯胺酮的PBS溶液麻醉。所有豚鼠每周稱重，并在3個月（12周）的治療后實行安樂死，之后將所有豚鼠的膝關(guān)節(jié)通過仔細解剖后整體移除行組織學(xué)觀察。（2）體外實驗部分則是預(yù)先將取出的 OA軟骨細胞和軟骨外植體分別放入含有一定量的SDF-1，siRNA CXCR4或者anti-CXCR4培

3、育基中進行培育。隨后的標(biāo)本中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）mRNA和蛋白質(zhì)水平分別使用定時聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定。（3）實驗動物的處理：作背外側(cè)胸部切口，并鈍性分離皮下后（~1厘米）形成皮下小袋，將微型滲透泵分別插入其中。插入前，200μL泵即儲滿44.44毫克/毫升AMD3100+ PBS溶液（組2）或單純PBS溶液（組3）。平均泵入速率為0.15μ升/小時，以此劑量第1組每只動物每天將收到160

4、μg AMD3100。因滲透泵持續(xù)時間為6周，滲透泵在治療過程中需更換一次。（4）結(jié)果測定：軟骨破壞程度以改良 Mankin’s評分進行評價。SDF-1,糖胺聚糖(GAGs), MMP-1, MMP-13和白細胞介素-1β(IL-1β)使用ELISA染色測定。
　　結(jié)果：
　　SDF-1在較早的時間里即已完全浸潤軟骨并且減少了蛋白聚糖的染色;在經(jīng)過含有SDF-1的培養(yǎng)基中，軟骨細胞及軟骨糖胺聚糖(GAGs)和MMP-13的活

5、性明顯增加。而在使用siRNA CXCR4或者CXCR4抗體干擾SDF-1和CXCR4之間的聯(lián)系后，SDF-1的效果則明顯被減弱。染色顯示，經(jīng)AMD-3100治療的實驗組，其膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的Mankin’s評分相較于對照組是最低的。同時，在經(jīng)AMD-3100治療的實驗組中，SDF-1， GAG，MMP1，MMP-13，和IL-1β在關(guān)節(jié)液和血液中的的水平也明顯低于對照組。
　　結(jié)論：
　　本實驗成功建立了原發(fā)性O(shè)A的豚鼠模型