液質聯(lián)用技術用于兩種含三七和丹參的中藥制劑的質量控制.pdf

1、中藥制劑是指在中醫(yī)藥理論指導下，以中藥飲片為原料，按規(guī)定的處方和制法，將其加工成具有一定規(guī)格、可直接用于臨床的藥品。中藥制劑成分復雜多變，應采用專屬性好、靈敏度高的分析方法對其進行分析。液質聯(lián)用技術(LC-MS)不僅具有高效液相色譜的分離功能，還具有質譜的結構解析功能，專屬性好、靈敏度高，尤其適合中成藥復雜體系的分析。
　　三七為五加科植物三七的干燥根和根莖，具有散瘀止血，消腫定痛之功效。丹參為唇形科植物丹參的干燥根和根莖，具有活

2、血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。兩味中藥都具有活血化瘀止痛的功效，在臨床上經常配伍應用，具有一定的協(xié)同作用。復方血栓通膠囊由三七、丹參、玄參、黃芪四味中藥配伍組成，具有活血化瘀，益氣養(yǎng)陰的功效，臨床上用于血瘀兼氣陰兩虛證的視網膜靜脈阻塞及穩(wěn)定性勞累型心絞痛的治療。冠心丹參滴丸由三七、丹參和降香三味中藥組成，具有活血化瘀，理氣止痛的功效，臨床上用于氣滯血瘀所致的胸痹心痛，冠心病心絞痛的治療。
　　本研究即以這兩種制劑為研

3、究對象，探索正負離子區(qū)段切換的LC-MS/MS技術在中藥制劑復雜體系中多種化學成分同時定量分析的應用，以期為其質量控制提供有效方法。
　　第一部分 LC-MS/MS技術同時測定復方血栓通膠囊中8種化學成分
　　目的:建立正負離子區(qū)段切換的LC-MS/MS方法同時定量復方血栓通膠囊中8種化學成分:哈巴苷(1)、三七皂苷R1(2)、人參皂苷Rg1(3)、人參皂苷Rb1(4)、丹酚酸B(5)、哈巴俄苷(6)、黃芪甲苷(7)、丹參酮

4、ⅡA(8)，并用該方法對復方血栓通膠囊進行質量控制。
　　方法:1質譜條件:采用電噴霧離子源，正負離子區(qū)段切換的多反應監(jiān)測(MRM)模式，0-3.00 min和6.23-8.06 min采用正離子模式，分別用于哈巴苷和丹參酮ⅡA測定，3.00-6.23 min采用負離子模式，用于三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、丹酚酸B、哈巴俄苷和黃芪甲苷Ⅳ的測定;3.00-3.03 min、6.20-6.23min為極性切換時間。2

5、色譜條件:色譜柱為Kinetex2.6μ XB-C18（75 mm×3.00 mm，2.6μm）;經考察流動相中加入的甲酸的濃度(0.05％、0.1％、0.2％、0.3％)對于峰響應值和峰形的影響，流動相優(yōu)化為為甲醇-乙腈(1∶1，v/v，A)和含0.1％甲酸的1mmol/L乙酸銨溶液(B)，梯度洗脫，洗脫程序如下:0-0.5 min，30-95％A，0.5-7.0 min，95％A，7.0-8.0 min，95-30％A;柱溫:30℃

6、;流速:0.3 mL/min;進樣量:10μL。3樣品提取條件:分別對提取溶劑甲醇的濃度(25％、50％、75％和100％)和超聲時間(20 min、40 min、60 min、80 min)進行了考察，采用75％甲醇對復方血栓通膠囊樣品超聲提取8種成分，提取時間為60 min，稀釋溶劑為10％甲醇。4對建立的方法進行了較全面的方法學驗證，包括專屬性、定量限、檢測限、線性范圍、準確度、精密度、重復性和溶液穩(wěn)定性。5采用所建立的方法對3批

7、復方血栓通膠囊中8種化學成分進行了含量測定。
　　結果:采用正負離子掃描區(qū)段切換技術和多反應監(jiān)測（MRM）模式，可以實現(xiàn)一次進樣同時獲得復方血栓通膠囊中8種成分的較優(yōu)異的靈敏度。方法可靠、準確、專屬性良好。8種化學成分的濃度與峰面積在測定濃度范圍內成良好的線性關系，在線性范圍內，所有分析物的相關系數均在0.9947-0.9998之間。平均回收率在95.4％-103.9％之間，日內和日間精密度的RSD值在0.8％至3.7％之間。重復

8、性試驗的RSD值在1.3％至3.6％之間。穩(wěn)定性試驗的RSD值在1.1％至4.8％之間。含量測定結果表明:不同批次的樣品中，8種化學成分的含量存在差異。丹參酮ⅡA和人參皂苷Rb1的批間RSD值分別為33.45％和20.51％，哈巴苷、人參皂苷Rg1、哈巴俄苷和黃芪甲苷Ⅳ的批間RSD值小于10％，三七皂苷R1和丹酚酸B的批間RSD值分別為10.96％和13.57％。
　　結論:本研究采用正負離子區(qū)段切換的LC-MS/MS方法同時測定

9、復方血栓通膠囊中8種化學成分，本法簡便、快速、靈敏度高、專屬性好，為復方血栓通膠囊提供了新的質量控制方法。
　　第二部分 LC-MS/MS技術同時測定冠心丹參滴丸中6種化學成分
　　目的:建立正負離子區(qū)段切換的LC-MS/MS方法同時測定冠心丹參滴丸中6種化學成分:三七皂苷R1(1)、人參皂苷Rb1(2)、丹酚酸B(3)、人參皂苷Rg1(4)、反式-橙花叔醇(5)、丹參酮ⅡA(6)，并應用于冠心丹參滴丸的質量控制。
　

10、　方法:1質譜條件:采用電噴霧離子源，正負離子區(qū)段切換的多反應監(jiān)測(MRM)模式。0-3.5 min采用負離子模式，用于三七皂苷R1(1)、人參皂苷Rb1(2)、丹酚酸B(3)、人參皂苷Rg1(4)的測定，3.50-3.53min采用正離子模式，用于極性轉換，3.53-6.03 min采用正離子模式，用于反式-橙花叔醇(5)和丹參酮ⅡA(6)的測定。2色譜條件:色譜柱為Synergi4μ fusion-RP(50mm×3.0 mm，4μ

11、m)，柱溫:35C。流動相為乙腈(A)和含0.1％甲酸的1 mmol/L乙酸銨溶液(B)，梯度洗脫，洗脫程序如下:0-0.5 min,35％-95％A;0.5-6.0 min,95％A;6.0-7.0 min,95％-35％A。分析時間7 min。流速:0.4 mL/min。進樣量:10μL。3樣品提取方法:分別對提取溶劑甲醇的濃度（25％、50％、75％和100％）和超聲時間(20 min、40 min、60 min、80 min)進

12、行了考察，采用75％甲醇作溶劑，超聲提取60 min，可以將藥材中的6種成分完全提取。4對建立的方法進行了較全面的方法學驗證，包括定量限、檢測限、線性范圍、精密度、準確度、儀器重復性和溶液穩(wěn)定性。5采用所建立的方法對3批冠心丹參滴丸中6種化學成分進行了含量測定。
　　結果:采用正負離子掃描區(qū)段切換技術和多反應監(jiān)測(MRM)模式，可以實現(xiàn)一次進樣同時獲得冠心丹參滴丸中6種化學成分的較優(yōu)異的靈敏度。方法可靠、準確、專屬性良好。在測定濃

13、度范圍內，各成分的濃度和峰面積均具有良好的線性關系，各分析物的相關系數均在0.9904-0.9993之間。平均回收率在94.5％-103.7％之間，RSD值在1.6％-4.7％之間。日內和日間精密度的RSD值分別在1.6％-3.7％之間和1.7％-3.5％之間。重復性試驗的RSD值在1.3％-3.4％之間。穩(wěn)定性試驗的RSD值在1.6％-3.8％之間。測定結果顯示，丹酚酸B和丹參酮ⅡA的RSD分別為50.51％和21.3％，反式-橙花叔