高效毛細(xì)管電泳及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥質(zhì)量控制過(guò)程中的應(yīng)用.pdf

1、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)技術(shù)是一種與高效液相色譜(HPLC)分離機(jī)理不同的分離技術(shù)，該技術(shù)具有分離效率高，實(shí)驗(yàn)消耗較少，柱系統(tǒng)易清洗等優(yōu)點(diǎn)，在復(fù)雜樣品的分離分析上可作為液相色譜的一種有力補(bǔ)充。中藥材成分復(fù)雜，分離分析難度較高，本文探索性地采用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)，對(duì)太子參、金銀花、龍膽和蓮子心四種藥材中的有效成分進(jìn)行分析，為利用該技術(shù)對(duì)中藥材進(jìn)行質(zhì)控的可行性提供了相關(guān)理論和應(yīng)用基礎(chǔ)。本文還采用高效液相色譜．電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-

2、ESI-TOF/MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)龍膽和蓮子心有效成分進(jìn)行了分析，鑒定出了其中的多種化合物?，F(xiàn)將本文主要研究結(jié)果歸納如下： 1．建立了測(cè)定太子參中環(huán)肽Pseudostellarin B含量的HPCE分析方法，并對(duì)10種不同產(chǎn)地太子參中環(huán)肽Pseudostellarin B的含量進(jìn)行了測(cè)定。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了太子參HPCE指紋圖譜研究，采用中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件對(duì)不同太子參樣品的HPCE指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算。 2．建立了

3、測(cè)定金銀花和山銀花藥材中綠原酸、槲皮素和蘆丁含量的高效毛細(xì)管電泳(HPCE)分析方法，并對(duì)其進(jìn)行指紋圖譜研究。采用加速溶劑萃取法(ASE)對(duì)藥材進(jìn)行提取，在選定的HPCE工作條件對(duì)金銀花藥材進(jìn)行了含量測(cè)定。并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了金銀花HPCE指紋圖譜研究，采用中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件對(duì)。HPCE指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算，以系統(tǒng)生成的對(duì)照指紋圖譜為對(duì)照模板，同一產(chǎn)地金銀花藥材指紋圖譜相似度均在0.93以上，不同產(chǎn)地金銀花藥材指紋圖譜相似度在0

4、.77-0.98之間不等，且可有效區(qū)分金銀花和山銀花藥材。 3．建立利用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)龍膽藥材中龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸進(jìn)行富集和分離純化的方法，對(duì)D301，AB-8，D101，XDA-1四種大孔樹(shù)脂對(duì)龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸的吸附性能進(jìn)行了比較，最終確定采用D301型大孔樹(shù)脂對(duì)二者進(jìn)行富集、純化。全程采用HPLC進(jìn)行龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸濃度監(jiān)測(cè)，對(duì)該過(guò)程中的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸分別富集在8％和55％的乙醇洗脫液中，洗

5、脫液濃縮后冷凍干燥，可得到純度分別為74.3％和80.9％的粗產(chǎn)物。 4．建立了膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEKC)和微乳液毛細(xì)管電動(dòng)色譜法(MEEKC)分析龍膽藥材中龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸含量的方法。分別考察了兩種分離模式下電泳介質(zhì)的構(gòu)成和電泳過(guò)程中的各操作參數(shù)對(duì)樣品分離過(guò)程的影響，優(yōu)化了MEKC和MEEKC的分析條件，在各自對(duì)應(yīng)的緩沖液體系和選定的工作條件下，龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸與其他組分達(dá)到了基線分離，對(duì)六處不同產(chǎn)地的龍膽藥材進(jìn)行

6、了分析，并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了t檢驗(yàn)，結(jié)果表明，兩種模式下，測(cè)定結(jié)果之間不存在顯著性差異，而不同產(chǎn)地的龍膽藥材的龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸含量之間存在較大差異。 5．建立了采用MEKC，MEEKC及非水毛細(xì)管電泳(NACE)三種模式對(duì)蓮子心中的的蓮心堿，異蓮心堿和甲基蓮心堿進(jìn)行定量分析的方法。采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了分析條件。結(jié)果表明，三種模式均可用于蓮子心藥材中生物堿含量的測(cè)定及其質(zhì)量控制，將其用于實(shí)際的提取物分析工作中，方法快捷，結(jié)

7、果可靠。 6．建立HPLC-ESI-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)用于中藥材龍膽有效成分含量測(cè)定及其指紋圖譜研究的方法。龍膽藥材ASE粗提物通過(guò)氯仿萃取分為水溶相和氯仿相，采用HPLC-DAD對(duì)龍膽苦苷和馬錢(qián)子甙酸進(jìn)行定量測(cè)定，并在此基礎(chǔ)上建立龍膽藥材的HPLC二元特征指紋圖譜，采用HPLC-ESI-TOF/MS對(duì)指紋圖譜中的特征峰進(jìn)行定性。結(jié)合文獻(xiàn)，通過(guò)各色譜峰紫外光譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，鑒別出了水溶相中的馬錢(qián)子甙酸，阿魏酸，和龍膽苦苷三種化合

8、物，初步判斷氯仿相中的主要組分為三萜類化合物。采用中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件對(duì)不同龍膽樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算，同批次藥材指紋圖譜相似度均在0.98以上，表明本文所建立的方法重現(xiàn)性好；6處不同產(chǎn)地藥材水相指紋圖譜相似度均在0.90以上，而氯仿相指紋圖譜相似度在0.62-0.99之間不等，說(shuō)明不同產(chǎn)地龍膽藥材的質(zhì)量差異主要體現(xiàn)在三萜類化合物上。本方法可用于龍膽藥材有效成分的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。 7．發(fā)展了HPLC-DAD-ES

9、I-TOF/MS分析蓮子心中生物堿類化合物的方法，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行了蓮子心藥材的指紋圖譜研究。采用加速溶劑萃取法(ASE)對(duì)蓮子心進(jìn)行提取，采用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)其中的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，鑒定了其中的六種生物堿分別為：前荷葉堿，蓮心季銨堿，蓮心堿，異蓮心堿，荷葉堿和甲基蓮心堿。利用指紋圖譜相似度計(jì)算軟件對(duì)所得指紋圖譜進(jìn)行分析，產(chǎn)自安徽的12批蓮子心藥材指紋圖譜相似度均在0.．98以上，證明本方法重現(xiàn)性較高