柴樸湯對肝郁型哮喘miR-21、PTEN的表達及嗜酸性粒細胞凋亡的影響.pdf

1、研究目的：通過研究柴樸湯對肝郁型哮喘大鼠miR-21、PTEN表達及嗜酸性粒細胞凋亡的影響，從而探討柴樸湯防治肝郁型哮喘的機制與miR-21、PTEN及嗜酸性粒細胞凋亡之間的關(guān)系。
　　研究方法：1）70只雄性SD大鼠隨機原則分為肝郁組(n=30）與非肝郁組（n=40），肝郁組大鼠于第1~28天進行慢性不可預(yù)見性應(yīng)激刺激，非肝郁組不做任何處理。造模結(jié)束后檢測肝郁組與非肝郁組大鼠體重變化、糖水消耗量、血液腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）含

2、量，評價肝郁型模型。造模成功后將肝郁組與非肝郁組每10只分為一組一共7組，非肝郁組分為對照組、正常中藥組、哮喘組、哮喘治療組，肝郁組分為肝郁哮喘組、肝郁哮喘治療組、地塞米松組。哮喘組、哮喘治療組、肝郁哮喘組、肝郁哮喘治療組、地塞米松組5組采用用卵蛋白（OVA）誘導(dǎo)復(fù)制哮喘模型。自霧化致敏大鼠造模開始，每次霧化吸入致敏劑前30 min，各組大鼠均予以胃內(nèi)注藥處理。正常中藥組、哮喘治療組、柴樸湯組予以柴樸湯顆粒（每克顆粒含生藥18.5g）3

3、50 mg/kg灌胃；地塞米松組大鼠予以地塞米松1 mg/kg灌胃；正常對照組、哮喘模型組、肝郁哮喘組3組大鼠予以等量生理鹽水處理。干預(yù)結(jié)束后，根據(jù)各組大鼠的癥狀及體征進行評分；肺功能測定，小動物呼吸機測定各組大鼠在不同濃度乙酰膽堿激發(fā)下測定的氣道阻力；蘇木素-伊紅染色觀察各組大鼠氣道及肺組織病理改變；涂片法測定各組大鼠支氣管肺泡灌洗液中白細胞、嗜酸性粒細胞數(shù)，嗜酸性粒細胞比例；用流式細胞計數(shù)測定支氣管灌洗液 EOS凋亡率；熒光實時定量

4、PCR檢測血液及肺組織miR-21水平表達；蛋白質(zhì)免疫印跡（Western-blot）和RT-PCR檢測肺組織表達PTEN及PTEN mRNA水平。
　　結(jié)果：1、肝郁模型的鑒定：1）體重比較：肝郁組體重286.69±7.36（g)造模結(jié)束后較對照組233.46±8.52（g)明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；2)肝郁組糖水消耗量8.41±0.79（ml)造模結(jié)束后較對照組19.42±0.86（ml)明顯降低，差異具有

5、統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05);3)正常對照組血漿ACTH含量709±263（ng/L)造模結(jié)束后較肝郁組1768±256（ng/L)明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05);
　　2、各組大鼠癥狀評分及肺功能結(jié)果：哮喘組和肝郁哮喘組大鼠支氣管癥狀評分及肺功能測定氣道阻力高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘高于哮喘組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組低于哮喘組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮

6、喘治療組、地塞米松組均低于肝郁哮喘組，,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；支氣管肺泡灌洗液細胞分類計數(shù)白細胞細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞總數(shù)、及嗜酸性粒細胞百分比哮喘組與肝郁哮喘組均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；其中肝郁哮喘組高于哮喘組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組低于哮喘組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘治療

7、組、地塞米松組均低于肝郁哮喘組，,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05)。支氣管肺組織HE染色可見：正常對照組、正常中藥組支氣管肺組織結(jié)構(gòu)正常完整，未見炎癥細胞浸潤，支氣管壁厚度正常；哮喘組：大量粘液栓，鏡下黏膜上皮局部脫落，基底層膜增厚及玻璃樣變，粘膜下水腫，粘液腺增生。杯狀細胞增多，平滑肌增生肥大，可見平滑肌破壞斷裂，在管壁及粘液栓中可見嗜酸性粒細胞、單核細胞、淋巴細

8、胞和漿細胞浸潤。相對于哮喘組肝郁哮喘炎癥反應(yīng)及氣道重塑更為嚴重；余各組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組及肝郁哮喘組。
　　3、各組大鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞凋亡率哮喘組（4.20±0.41）及肝郁哮喘組（4.29±0.28）嗜酸性粒細胞凋亡率較對照組（5.82±0.48）明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘組（4.20±0.41）與肝郁哮喘組（4.29±0.28）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。哮喘治療組（1

9、5.74±0.34）嗜酸性粒細胞凋亡率高于哮喘組（4.20±0.41），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），肝哮治療組（15.77±0.42）及地塞米松組（15.43±0.55）嗜酸性性粒細胞凋亡率明顯高于肝哮治療組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。4、各組大鼠血液及肺組織中miR-21的相對表達量哮喘組、肝郁型哮喘組血液和肺組織miR-21的相對表達量明顯高于

10、對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘組血液和肺組織miR-21相對表達量高于哮喘組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組血液和肺組織 miR-21相對表達量低于哮喘組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝哮治療組及地塞米松組均低于肝郁哮喘組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組、地塞米松組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　5、各組大鼠肺組織PTENmRNA、PTEN蛋白的相對

11、表達量哮喘組及肝郁哮喘組肺組織PTENmRNA及蛋白相對表達量低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；哮喘組表達高于肝郁型哮喘組，哮喘治療組表達高于哮喘組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；肝哮治療組及地塞米松高于肝郁哮喘組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；哮喘治療組、肝哮治療組、地塞米松組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：1、肝郁型哮喘大鼠血液miR-21表達增加，且與哮喘的癥狀、炎癥反應(yīng)程度呈正相關(guān)，