腦轉(zhuǎn)移瘤中Musashi1及Numb的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)腦轉(zhuǎn)移瘤中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Musashi1（Msi1）及Numb的表達(dá)情況，探討二者在腦轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，進(jìn)一步明確腫瘤干細(xì)胞在腦轉(zhuǎn)移瘤形成中的作用，以期為腦轉(zhuǎn)移瘤發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制提供新的思路與方向。
　　方法：
　　1.選取51例經(jīng)手術(shù)切除的腦轉(zhuǎn)移瘤標(biāo)本，29例原發(fā)腫瘤標(biāo)本，15例正常人腦組織標(biāo)本。一部分置于10％福爾馬林溶液中固定，常規(guī)制作蠟塊保存；另一部分在新鮮狀態(tài)下放入-80℃低溫冰箱中保存。

2、
　　2.設(shè)定腦轉(zhuǎn)移瘤組與原發(fā)腫瘤組為實(shí)驗(yàn)組，正常腦組織組為對(duì)照組。采用免疫組織化學(xué) SP法及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）的方法分別對(duì) Msi1與Numb蛋白及mRNA在各組織中進(jìn)行檢測(cè)。每張切片隨機(jī)取10個(gè)高倍視野，在高倍鏡（×400）下依據(jù)染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)進(jìn)行半定量分析；對(duì)電泳圖像中的目的基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析，測(cè)

3、定目的基因灰度值，以內(nèi)參GAPDH的OD值標(biāo)化目的基因的OD值，作為相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　3.收集所有患者的詳細(xì)資料，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料用Spearman相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，連續(xù)變量資料用Pearson相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，以上均為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.Msi1蛋白及mRNA在不同組織

4、中表達(dá)情況
　　免疫組化結(jié)果顯示：Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.8%（31/51）、65.5%（19/29）及13.3%（2/15）。其中Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Msi1蛋白在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義（P<0.05）。
　　RT-PCR結(jié)果顯示：Msi1 mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.78±0.50、0.60±0.36及0.38±0.29。其中Msi1 mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Msi1 mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Msi1 mRNA在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織

6、中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.Numb蛋白及mRNA在不同組織中表達(dá)情況
　　免疫組化結(jié)果顯示：Numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為33.3%（17/51）、31.0%（9/29）及73.3%（11/15）。其中Numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義（P<0.05）；Numb蛋白在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　RT-PCR結(jié)果顯示：Numb mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.34±0.21、0.47±0.31及2.42±1.82。其中Numb mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Numb mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá)

8、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Numb mRNA在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中表達(dá)相關(guān)性分析
　　在腦轉(zhuǎn)移瘤組織中，蛋白表達(dá)經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，Msi1蛋白與Numb蛋白的表達(dá)呈負(fù)線性相關(guān)（r=-0.258, P<0.05）；基因表達(dá)經(jīng)Pearson相關(guān)性分析， Msi1基因與Numb基因mRNA相對(duì)表達(dá)呈負(fù)線性相

9、關(guān)（r=-0.345，P＜0.05）。
　　4.Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)與患者臨床病理資料間的分析
　　Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)情況與患者的性別、年齡及組織來(lái)源均無(wú)關(guān)（均P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.Msi1蛋白及mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中高表達(dá)；Numb蛋白及mRNA在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中低表達(dá)，說(shuō)明二者表達(dá)異常可能在腦轉(zhuǎn)移瘤形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　2.Msi1與