B細(xì)胞易位基因1在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)及意義.pdf

1、腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，據(jù)國內(nèi)流行病學(xué)統(tǒng)計，其發(fā)病率在35.26％-60.96%（平均44.69%）。其發(fā)生于神經(jīng)外胚層，由于其發(fā)病機制不清楚，臨床表現(xiàn)多樣性，通常被認(rèn)為是一種致命的人類惡性腫瘤，其呈浸潤性生長，治療效果差，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差。WHO(2007)將腦膠質(zhì)瘤劃分為Ⅰ～Ⅳ級：1.低級別膠質(zhì)瘤(WHOⅠ級和Ⅱ級)常見于兒童和年輕人，2.高級別膠質(zhì)瘤(WHOⅢ級和Ⅳ級)常見于中老年人。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤( glio

2、blastoma multiforme，GBM)最具破壞性，盡管現(xiàn)階段的腫瘤檢測以及放化療等治療手段都有了很大的進(jìn)步，GBM患者的中位生存期仍然很短，約14個月。這就促使我們不得去尋找更多更有效的治療辦法。近年來分子生物學(xué)的快速發(fā)展推動了腦膠質(zhì)瘤治療的進(jìn)步，使得分子靶向治療越來越成為腦膠質(zhì)瘤治療研究的熱門領(lǐng)域，可以預(yù)言隨著越來越多的靶向藥物被發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤的治愈率和中位生存率將可能獲得提高。因此，分析腦膠質(zhì)瘤的生物學(xué)特性，從基因水平探索

3、腦膠質(zhì)瘤相關(guān)發(fā)病機制成為研究的焦點。
　　B細(xì)胞易位基因(B-cell translocation gene，BTG)屬人類BTG/TOB的家族，該家族至少包括6種不同成員，即 BTG1、BTG2/PC3/Tis21、BTG3/Ana、BTG4/PC3B、TOB1和TOB2，參與細(xì)胞增殖及生長周期的調(diào)控，并介導(dǎo)多種細(xì)胞分化。研究表明 BTG1基因?qū)?xì)胞增殖起負(fù)調(diào)控作用，其表達(dá)隨著細(xì)胞周期的變化而變化，在細(xì)胞周期的G0/G1期BTG

4、1表達(dá)最高，隨后下降。BTG1在癌組織中表達(dá)下降，如卵巢癌、食管癌、胃癌、肝細(xì)胞癌、甲狀腺癌、乳腺癌及肺癌等，且其過表達(dá)抑制多種癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤和凋亡，如卵巢癌等。以上研究證實 BTG1是一種新的抑癌基因。雖然這些研究提示 BTG1具備腫瘤抑制基因的特征，BTG1基因是否是腦膠質(zhì)瘤相關(guān)抑制基因？在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)狀況如何？目前國內(nèi)外尚未見文獻(xiàn)報道。
　　人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因（ phosphatas

5、e and tensin homology deleted on chromosome10，PTEN）是位于人類10號染色體的一個抑癌基因，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的抑制作用，它在多種腫瘤如子宮內(nèi)膜癌，前列腺癌，腎細(xì)胞癌，結(jié)腸癌及肺癌等中存在雜合缺失或突變。有研究證明 PTEN具有抑制腦膠質(zhì)瘤生長的作用并有少數(shù)研究試圖通過它尋找新的治療靶點。
　　本研究采用免疫組化EnVision法和Western blot方法檢測并分析B

6、TG1和PTEN蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以期為腦膠質(zhì)瘤的臨床治療找到新的基因靶點。
　　材料和方法:
　　1.收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年12月至2016年4月行腫瘤全切的80例膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本，并選取25例顱腦減壓所得正常腦組織作對照。
　　2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)（EnVision法）染色方法分別檢測各級別膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)情況。
　　3.隨機選取

7、4例新鮮的腦膠質(zhì)瘤組織及正常腦組織，應(yīng)用Western blot檢測其中BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)情況。
　　4.應(yīng)用SPSS17.0版軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。多組之間數(shù)據(jù)比較采用Kruskal Wallis Test分析；相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗和Logistic回歸分析。所有的實驗數(shù)據(jù)均至少重復(fù)3次，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　免疫組化結(jié)果：
　　1. BTG1陽性表達(dá)主要

8、定位于細(xì)胞漿，呈淺黃色、黃褐色或棕黃色染色。BTG1在正常腦組織中的陽性表達(dá)率較高，表達(dá)率為96.0%(24/25)，表達(dá)強度為較強，而在腦膠質(zhì)瘤的陽性表達(dá)率降低，表達(dá)率為73.8%(59/80)，表達(dá)強度減弱。二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2. PTEN陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿，呈淺黃色、黃褐色或棕黃色染色。PTEN在正常組織中的陽性表達(dá)率較高，表達(dá)率為100%（25/25)，表達(dá)強度為較強，而在膠質(zhì)瘤的陽性表

9、達(dá)率降低，表達(dá)率為77.5%（62/80)，表達(dá)強度減弱。二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3. BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)與膠質(zhì)瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤組織學(xué)WHO分級的關(guān)系的分析結(jié)果顯示腦膠質(zhì)瘤組織中二者的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)WHO分級呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，隨著腦膠質(zhì)瘤的級別增高，蛋白表達(dá)率降低且表達(dá)強度下降。各級膠質(zhì)瘤及正常腦組織之間BTG1和PTEN表達(dá)分別兩兩比較（Kru

10、skal Wallis Test分析）顯示，Ⅰ級膠質(zhì)瘤與正常腦組織相比無顯著差異（P＞0.05），Ⅲ級和Ⅳ級相比無顯著差異（P＞0.05）；其余各組之間相比均有顯著差異( P＜0.05)。BTG1和PTEN之間的相關(guān)分析(Spearman秩相關(guān)檢驗)顯示二者表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系；Logistic回歸分析顯示BTG1和PTEN蛋白在20歲以上患者比20歲以下患者的表達(dá)率及表達(dá)強度下降(P＜0.05)；但二者的表達(dá)與腫瘤直徑及患者性別無關(guān)（P＞

11、0.05）。
　　Western blot結(jié)果：
　　腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)分析結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)低于正常腦組織，與免疫組織化學(xué)的結(jié)果一致。
　　結(jié)論:
　　1.腦膠質(zhì)瘤組織比正常組織BTG1和PTEN蛋白的表達(dá)陽性率明顯降低，提示其表達(dá)水平與腫瘤組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān)，提示BTG1在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中可能起著重要的生物學(xué)作用。
　　2.BTG1和