普通肝素通過(guò)減少HOXA9表達(dá)下調(diào)抑制內(nèi)皮細(xì)胞活化.pdf

1、目的：
　　內(nèi)皮細(xì)胞活化在許多血管病理過(guò)程中起主要作用，如炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化。內(nèi)皮細(xì)胞活化導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞上的白細(xì)胞粘附分子如細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1），血管粘附分子-1(VCAM-1)，E-選擇素表達(dá)增加。白細(xì)胞粘附分子對(duì)循環(huán)中的白細(xì)胞向炎癥組織聚集和轉(zhuǎn)移起重要作用。一些研究表明某些炎癥因子和其他生化物質(zhì)如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，佛波酯(PMA)，脂多糖(LPS)，白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)上調(diào)ICAM-1，VA

2、CM-1，E-選擇素表達(dá)，而IL-4，IL-10則下調(diào)這些分子的表達(dá)。HOXA9是一種同源異型盒基因，有研究表明可能是維持內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的必要條件，HOXA9表達(dá)減少是炎癥因子刺激內(nèi)皮細(xì)胞活化的先決條件，HOXA9過(guò)表達(dá)可引起NF-κB活性下調(diào)，從而抑制炎癥因子刺激下白細(xì)胞粘附分子的表達(dá)。許多臨床研究和實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肝素通過(guò)抑制NF-κB的活性抑制炎癥反應(yīng)，同時(shí)也有研究證實(shí)應(yīng)用肝素可以抑制LPS刺激下內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子E-選擇素、ICAM-1的表

3、達(dá)的作用，但普通肝素(UFH)是否通過(guò)影響HOXA9表達(dá)從而通過(guò)NF-κB通路影響內(nèi)皮細(xì)胞活化的機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討UFH對(duì)LPS誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)活化時(shí)HOXA9表達(dá)以及內(nèi)皮細(xì)胞活化的影響。
　　方法：
　　HUVECs細(xì)胞株傳代培養(yǎng)后隨機(jī)分4組(n=5)，施以相應(yīng)處理因素:①對(duì)照組（加入等量PBS）;②LPS組(LPS10μg/ml);③UFH組(UFH10U/ml);④UFH+LPS組(U

4、FH10U/ml+LPS10μg/ml)，UFH10U/ml30min后加入LPS10μg/ml。繼續(xù)在孵箱中孵育3h后收集各組細(xì)胞。用細(xì)胞核蛋白抽提試劑提取核蛋白，western blot檢測(cè)HUVECs中NF-κB的表達(dá)。提取總蛋白，western blot檢測(cè)HUVECs中E-選擇素、HOXA9的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　用Western blot方法檢測(cè)HUVECs各組細(xì)胞的E-選擇素、HOXA9、NF-κB的蛋白表達(dá)

5、情況并行相對(duì)灰度值檢測(cè)。對(duì)照組和肝素組HUVECs僅有少量E-選擇素表達(dá)，LPS組E-選擇素表達(dá)明顯增加（相對(duì)灰度值0.113±0.055），UFH+LPS組E-選擇素表達(dá)下降（0.057±0.017），二者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。LPS使HOXA9表達(dá)明顯下降（相比于對(duì)照組和肝素組），UFH+LPS組HUVECs表達(dá)HOXA9增加（與LPS相比）。HUVECs在LPS組表達(dá)NF-κB增加（相對(duì)灰度值0.845±0.025），