普通肝素對HMGB1介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白Claudin-5下調(diào)的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究高遷移率族蛋白B1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響，以及普通肝素對HMGB1介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白Claudin-5下調(diào)的保護(hù)作用。
　　方法：將經(jīng)胰酶消化后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞于培養(yǎng)瓶中傳代培養(yǎng)，并分成4組:空白對照組(加入等量PBS)、rhHMGB1處理組(100ng/ml)、普通肝素對照組(UFH10 U/ml)、rhHMGB1+

2、普通肝素處理組(100 ng/ml rhHMGB1+UFH10U/ml)。傳代培養(yǎng)后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，通過MTT測定法測定內(nèi)皮細(xì)胞的存活率。Transwell法測定內(nèi)皮細(xì)胞通透性。免疫熒光法對Claudin-5進(jìn)行表達(dá)及分布的測定。通過Western blotting法檢測Claudin-5的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：用rhHMGB1(100 ng/ml)處理內(nèi)皮細(xì)胞后，與空白對照組比較細(xì)胞活力無明顯變化(P＞0.05）;用rhHM

3、GB1(100 ng/ml)分別處理內(nèi)皮細(xì)胞3h、6h后，內(nèi)皮細(xì)胞屏障通透性較空白對照組無明顯變化(P＞0.05）;而經(jīng)rhHMGB1處理12h、24h后，與空白對照組相比，內(nèi)皮細(xì)胞屏障通透性顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而普通肝素和rhHMGB1共同孵育內(nèi)皮細(xì)胞12h、24h后，其內(nèi)皮細(xì)胞屏障通透性均低于rhHMGB1處理組(P＜0.05）。免疫熒光和Western blot研究表明，rhHMGB1處理內(nèi)皮細(xì)胞24h后，細(xì)