新娃兒藤堿類似物抗腫瘤作用及其機制研究.pdf

1、背景：
　　天然產(chǎn)物是抗腫瘤藥物的重要來源之一。娃兒藤堿最初是從印度娃兒藤中分離得到的生物堿，研究表明這類生物堿具有強大的抗腫瘤、抗炎和抗病毒等作用。其中代表性的娃兒藤堿類似物DCB-3503對 NCI抗腫瘤候選化合物篩選平臺中59株腫瘤細胞的平均生長抑制IC50（GI50）為10-8 M左右，并且抑制多藥耐藥腫瘤細胞的增殖，對其進行COMPARE分析提示這類化合物與已知抗腫瘤藥物的作用機制不同。目前還沒有該類化合物進入臨床使用或

2、者正在進行臨床研究。密花娃兒藤堿作為抗腫瘤候選化合物曾一度進入臨床Ⅰ期研究，但因其嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)毒性而被迫終止。盡管國內(nèi)外對其抗腫瘤機制已有較多報道，但其確切作用靶點仍不十分明確。因此，發(fā)現(xiàn)高效低毒的新類似物并探索其作用機制對于這類化合物的研究開發(fā)具有重要意義。
　　目的：
　　通過與南開大學汪清民教授實驗室合作，對娃兒藤堿類似物進行構效關系研究，旨在尋找更為有效的類似物。探索其抗腫瘤作用機制，揭示其新的抗腫瘤作用特點。

3、r>　　方法：
　　首先以 DCB-3503為先導化合物經(jīng)過結構修飾合成菲并吲哚里西啶類化合物和菲并喹諾里西啶類化合物，采用SRB法和 MTT法對這兩類化合物進行初步活性篩選；選擇兩個系列化合物中活性最高的化合物WM-12和Mchs-6R作為代表化合物，檢測其抗腫瘤譜；利用IncuCyte Zoom系統(tǒng)檢測化合物對腫瘤細胞的增殖抑制；采用克隆形成實驗檢測化合物對腫瘤細胞克隆形成能力的抑制；采用流式細胞術檢測化合物對細胞周期分布的影

4、響，并進一步利用 Aphdicolin同步化細胞周期后考察化合物對細胞周期進程的影響；采用BrdU標記法檢測化合物對細胞DNA合成的影響；采用Western Blot法檢測化合物對細胞DNA損傷和自噬相關蛋白的影響；采用Annexin V/PI雙染法檢測化合物誘導細胞凋亡的能力；采用臺盼藍拒染法檢測化合物引發(fā)細胞死亡的作用。
　　結果：
　　體外抗腫瘤活性篩選結果顯示菲并吲哚里西啶類化合物WM-12和菲并喹諾里西啶類化合物M

5、chs-6R活性較強，WM-12和Mchs-6R能顯著抑制血液腫瘤及多種實體瘤細胞的生長，具有廣譜的細胞增殖抑制活性。WM-12對31株腫瘤細胞的平均IC50值為18.7 nM，Mchs-6R對30株人腫瘤細胞的平均IC50為2.1 nM，均顯著優(yōu)于先導化合物DCB-3503（平均IC50=165.4 nM）。WM-12和Mchs-6R顯著抑制BEL-7402細胞的生長增殖及克隆形成。WM-12和Mchs-6R可誘導細胞S期阻滯進而延長

6、周期進程。進一步檢測發(fā)現(xiàn)WM-12和Mchs-6R能顯著抑制DNA的合成，但不能引起 DNA發(fā)生顯著的斷裂。化合物不能誘導細胞發(fā)生自噬；且高劑量化合物長時間作用細胞不能顯著誘導凋亡或死亡。WM-12和Mchs-6R還具抗多藥耐藥作用，對多種耐藥細胞的增殖抑制活性與對應親本細胞接近，耐藥系數(shù)值在1左右；化合物濃度依賴性地阻滯耐藥細胞的周期進展。
　　結論：
　　新娃兒藤堿類似物菲并吲哚里西啶類化合物WM-12和菲并喹諾里西啶類