新型微管蛋白抑制劑CA4類似物抗腫瘤作用分子機制研究.pdf

1、風(fēng)車子抑素A4(combretastatin A4，CA4)是目前已知微管蛋白抑制劑中活性最強的化合物之一。它能破壞增殖能力旺盛的腫瘤細胞有絲分裂紡錘體,致有絲分裂細胞阻滯于G2/M期,從而抑制腫瘤細胞增殖?；贑A4水溶性差,生物利用度低,且容易轉(zhuǎn)化成幾乎無活性的反式構(gòu)型,臨床應(yīng)用受到限制等缺陷,以CA4為先導(dǎo)化合物,成功獲得幾種新型高活性CA4類似物。本研究探討CA4及其類似物40B靶向微管抑制的分子機理。運用MTT法篩選檢測新型C

2、A4類似物對腫瘤細胞和正常細胞體外增殖抑制活性,結(jié)果顯示四種新型CA4類似物具有廣譜高效抗腫瘤活性,以40B活性最佳,IC50為8nmol/L。以MCF-7為模型探討40B靶向微管抑制分子機理。細胞流式術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)CA4及40B均呈濃度依賴性引發(fā)MCF-7細胞周期于G2/M期阻滯,以48h最為明顯。免疫熒光法從形態(tài)學(xué)上檢測MCF-7細胞微管蛋白在細胞核細胞質(zhì)分布和細胞凋亡,結(jié)果顯示CA4及40B抑制微管蛋白聚合作用呈劑量依賴性關(guān)系,使

3、細胞核內(nèi)微管明顯解聚,并能誘導(dǎo)MCF-7細胞凋亡。Western blotting分析MCF-7細胞G2/M期關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白Cyclin B1、Cdc2、p-Cdc2及微管蛋白α-tubulin、β-tubulin表達變化,結(jié)果顯示CA4及40B均呈濃度依賴性上調(diào)MCF-7細胞CyclinB1蛋白水平表達,下調(diào)Cdc2、p-Cdc蛋白水平的表達,但對α-tubulin、 β-tubulin蛋白水平表達無影響。綜上所述,40B和CA4均能以