新型組蛋白去乙酰化酶抑制劑的合成與其體外抗腫瘤作用及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)的平衡共同調(diào)節(jié)著正常細(xì)胞的分化和代謝行為，而腫瘤的發(fā)生往往是二者的失衡所引起的。短鏈脂肪酸類藥物(丁酸、丙戊酸)作為一種新型的組蛋白去乙?；敢种苿?HDACI)，研究發(fā)現(xiàn)其通過抑制細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤血管生成等分子機(jī)制來抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖。本實(shí)驗(yàn)合成了新型短鏈脂肪酸類藥物2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲，旨在探討對神經(jīng)膠質(zhì)瘤和肺癌細(xì)胞的抑制作用和細(xì)胞內(nèi)相

2、關(guān)蛋白的影響。
　　 方法：
　　 (1)通過引進(jìn)硫脲基團(tuán)，合成了白色結(jié)晶性粉末。
　　 (2)采用熔點(diǎn)測試，紅外光譜，核磁共振氫譜及質(zhì)譜等方法對該白色粉末進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 (3)以星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤U251和肺腺癌細(xì)胞株A549作為研究對象，采用MTT比色法，觀察2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲對兩種瘤細(xì)胞株在5個(gè)給藥濃度0.0875，0.175，0.35，0.70和1.40mmol/L，24h后的抑制

3、作用，并計(jì)算其半數(shù)抑制濃度(IC50)。
　　 (4)分為2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲高(1.00mmol/L)，中(0.50 mmol/L)和低(0.25mmol/L)3個(gè)給藥濃度組，陽性對照組(VPA，1.00mmol/L)，空白組(不給藥組)和溶劑組(DMSO)。采用Western blotting法比較兩株細(xì)胞各組的組蛋白去乙?；?和4(HDAC3和HDAC4)，p21waf1/CIP1蛋白的表達(dá)情況(上調(diào)/下調(diào))

4、。
　　 結(jié)果：
　　 (1)合成出白色結(jié)晶性粉末。
　　 (2)結(jié)構(gòu)鑒定的結(jié)果與參考文獻(xiàn)比較基本相符，證實(shí)該白色粉末為2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲。
　　 (3)U251細(xì)胞株，5個(gè)給藥濃度作用24h后的抑制率分別為18.56[％]，23.11[％]，24.48[％]，36.41[％]和63.54[％]，陽性對照丙戊酸的抑制率為7.73[％]。IC50值為1.0287mmol/L。A549細(xì)胞株，5

5、個(gè)給藥濃度作用24h后的抑制率分別為9.66[％]，15.93[％]，33.18[％]，84.32[％]和87.91[％]。IC50為0.6235mmol/L。
　　 (4)Western blotting法比較各組中組蛋白去乙?；?和4(HDAC3和HDAC4)，p21waf1/CIP1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示出在星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251中，HDAC3和HDAC4中濃度組的條帶較高和低濃度組明顯，陽性對照組稍強(qiáng)，溶劑組和空白

6、組則均清晰。P21waf1/CIP1蛋白在高，中和低3個(gè)給藥濃度組條帶均較清晰，陽性對照組稍弱，溶劑組和空白組則呈現(xiàn)模糊。而在肺腺癌A549細(xì)胞中，HDAC3，HDAC4在高，中和低3個(gè)給藥濃度組均未出現(xiàn)條帶，陽性組稍微明顯，溶劑組和空白組最清晰。P21waf1/CIP1蛋白在中和低兩個(gè)濃度的條帶較為明顯，高濃度組和陽性對照組稍弱，空白組和溶劑組更弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)HDAC3的分子量為50 kDa，HDAC4的分子量為130 kDa。P2

7、1waf1/CIP1蛋白分子量為21kDa。
　　 結(jié)論：
　　 (1)成功合成出新型短鏈脂肪酸類藥物2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲。
　　 (2)該化合物對兩種腫瘤細(xì)胞株均有明顯的增殖抑制作用，且呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　 (3)Western blotting法對各組的蛋白的影響表明在U251細(xì)胞株中，HDAC3和HDAC4在中濃度組中的表達(dá)量過強(qiáng)，陽性組對蛋白也有一定的影響，溶劑干擾和正常腫瘤細(xì)胞均呈

8、現(xiàn)高表達(dá)。P21waf1/CIP1蛋白的高，中和低3個(gè)給藥濃度組的表達(dá)量均高于陽性對照組，而在正常的腫瘤細(xì)胞和溶劑對照組中表達(dá)量均很低。而在A549細(xì)胞株中，HDAC3和HDAC4在藥物作用后表達(dá)量明顯下降。P21waf1/CIP1蛋白在給藥組中表達(dá)量較高，呈明顯上調(diào)趨勢。P21waf1/CIP1蛋白在給藥組中表達(dá)量較高，呈明顯上調(diào)趨勢。而正常的腫瘤細(xì)胞和溶劑對照組中表達(dá)量較低。以上結(jié)果提示了2,2,3,3-四甲基環(huán)丙酰硫脲的抑制腫瘤細(xì)