健康嬰幼兒攜帶艱難梭菌的流行病學特征及跟蹤調查.pdf

1、目的：艱難梭菌（Clostridiumdifficile,CD）是腸道內一種專性厭氧的芽孢桿菌，有產毒株和非產毒株，均能夠在健康人體內無癥狀定植。在受到某些因素影響如抗生素的長期應用或者免疫抑制劑的使用等使腸道菌群環(huán)境發(fā)生改變而引發(fā)艱難梭菌感染（Clostridiumdifficileinfection,CDI），繼而發(fā)生艱難梭菌相關性腹瀉（Clostridiumdifficileassociateddiarrhea,CDAD）等癥狀。

2、CD在健康嬰幼兒體內能夠長期的無癥狀定植，定植率在各個國家和地區(qū)變異性較大，且各地區(qū)定植株的型別及影響定植的因素也各不相同。本地區(qū)關于這方面的流行病學資料相對有所欠缺，本研究擬對河北邯鄲地區(qū)0-3周歲的健康嬰幼兒腸道內CD的定植情況及影響其定植的因素進行流行病學調查，同時對若干嬰兒進行為期12個月的跟蹤調查，了解其體內CD定植的動態(tài)情況及發(fā)生變化的影響因素。使河北地區(qū)健康嬰幼兒體內CD定植的流行病學資料更加豐富，為臨床制定預防和治療疾病

3、策略提供證據(jù)。
　　方法：
　　1、從2014年10月至2015年12月，共收集河北邯鄲地區(qū)0-3周歲以內健康嬰幼兒糞便標本1098份，每人收取一次，并記錄每個嬰幼兒的基本資料。同時，對29名嬰兒從出生至12月齡進行為期1年的跟蹤調查，分別在出生時、1周、2周、3周、1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10月、11月、12月等16個時間點收取糞便標本，記錄每次當時的資料情況。
　　2、將收集的糞便標本

4、應用芽孢富集法進行CD的分離培養(yǎng)，并對疑似菌落進行鑒定。將鑒定得到的CD菌株按照細菌基因組DNA試劑盒的方法提取DNA，后采用多重PCR的方法檢測毒素A、B及二元毒素A、B基因，包括tcdA、tcdB、cdtA、cdtB、16SrDNA。
　　3、將提取的菌株DNA進行核糖體分型，分型結果用QuantityOne軟件做比對分析。分出的型別跟標準菌株類型比較并命名。
　　4、將一次性標本所得的CD采用瓊脂稀釋法進行藥物敏感實驗

5、，共選擇了非達霉素、萬古霉素、甲硝唑、利福平、利福昔明、紅霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、頭孢曲松、美羅培南、氯霉素、克林霉素等14種抗生素，分別測定其MIC值（最低抑菌濃度）。
　　結果：
　　1、1098位0-3歲健康嬰幼兒的糞便標本中共有250份標本分離培養(yǎng)出250株艱難梭菌，總攜帶率為22.77％（250/1098），其中產毒株攜帶率為12.57%（138/1098），在所有產毒株中有1株為tcdA+t

6、cdB+cdtA+cdtB+，其它均為tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-。所有菌株通過核糖體分型共分出15種不同的核糖體型別，型別中數(shù)量最多為HB-3型，占所有菌株的19.6%，其次是HB9型（14%）、HB1型（13.6%）、HB2型（10.8%）和HB5（10.4）。分析結果顯示母親的懷孕周期、近期應用抗生素和近期住院史可能是健康嬰幼兒體內艱難梭菌定植的影響因素。本次研究中未發(fā)現(xiàn)高產毒株型別027和078型。
　　2、抗

7、生素耐藥性分析中，從250株艱難梭菌對14種抗生素的MIC值測定結果可見，所有實驗菌株對萬古霉素、甲硝唑和非達霉素三種藥均高度敏感，沒有耐藥菌株；對美羅培南和氯霉素的耐藥率比較低，分別為2%和6.8%；對其他幾種藥物耐藥率均較高，由高到低依次為克林霉素（99.2%）、頭孢他啶（96.8%）、紅霉素（94.4%）、環(huán)丙沙星(88%)、利福平（63.2%）、利福昔明（63.2%）、四環(huán)素（54.4%）、左氧氟沙星（51.6%）、頭孢曲松（4

8、4.8%）。
　　3、跟蹤調查的結果，29位嬰兒共收集437份標本，其中20個嬰兒的糞便標本中發(fā)現(xiàn)有CD的定植，定植率為69%（20/29）。有產毒株定植的有15人，定植率為75%（15/20）。其中，111份陽性標本中分離出79株產毒艱難梭菌，所有分離菌株的產毒株定植率為71.2%（79/111）。定植CD的嬰兒中有4個在出生后1個月內定植CD，其它16個均為1月齡之后才有CD的定植。且在定植者中有些定植是連續(xù)的（4、5、7、8

9、、12號），有的是間斷性的（1、2、3、6、9、10、11、13、16、17、18、19號），還有個別是一過性的定植（14、15、20號嬰兒）。
　　4、在跟蹤研究中，111株艱難梭菌共分為8種核糖體型，其中HB9（n=14）和HB2（n=18）為非產毒型，其它幾種型別HB42（n=26）、HB1（n=16）、HB52（n=12）、HB3（n=15）、HB6（n=5）、HB5（n=5）均為產毒型別?；旧厦總€嬰兒體內定植的艱難梭菌

10、型別前后一致，其中8號在2月齡時糞便標本中分離出CD型別為HB3型，之后分離出的菌株型別為HB-42型；11號嬰兒則先后分離出HB1型和HB9型菌株，即之前分離出CD產毒株，后有非產毒CD的定植；15號有HB52型和HB1型菌株的先后定植；16號先后分離出HB1型和HB3型的艱難梭菌菌株。
　　結論：
　　1、本次研究中河北邯鄲地區(qū)0-3周歲健康嬰幼兒的艱難梭菌總攜帶率略低于國外相關報道，而產毒株攜帶率與國內報道結果相似。<

11、br>　　2、分析結果顯示母親的懷孕周期、近期應用抗生素和近期住院史可能是健康嬰幼兒體內艱難梭菌定植的影響因素，與國內外的報道結果相似。收集菌株的核糖體分型結果顯示，優(yōu)勢型別為HB3和HB9。而且本次分離的菌株型別中，有些型別同省內之前分離出的住院兒童和成人的菌株型別相同，提示艱難梭菌在這些個體間傳播的可能性。
　　3、一次性標本分離的菌株對14種抗生素的耐藥情況結果顯示，與國內的幾篇報道相比利福霉素類的耐藥率相對較高，可能與收集

12、標本所在地應用抗生素情況相關。其它幾種藥物的耐藥情況與國內報道的大多相似。
　　4、在跟蹤調查的嬰兒體內CD的定植率與第一部分中0-12月齡年齡段收取一次性標本的CD定植率相比較高，差異有統(tǒng)計學意義，說明只收取一次糞便標本會降低整體的CD定植率。隨著年齡的增長，嬰兒的CD定植率有上升的趨勢，且可能與添加輔食時間有關，而具體關系如何還需進一步研究證明。產毒型CD在嬰兒體內長期定植的型別中占優(yōu)勢，且有可能是以后成年階段發(fā)生CDI的一個