口咽癌和口腔癌HPV感染狀況及與預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、口咽癌是主要發(fā)生于舌根、軟腭、扁桃體、咽側(cè)壁等部位的鱗狀細(xì)胞癌?？谇话┦侵饕l(fā)生于舌體、頰粘膜、硬腭和牙齦等口腔黏膜的鱗狀細(xì)胞癌，嚴(yán)重影響人們的生命質(zhì)量。大量研究指出吸煙、飲酒、咀嚼檳榔及口腔不良修復(fù)體等是導(dǎo)致其發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素，然而有報(bào)道顯示15％-20%的患者無(wú)吸煙和飲酒史，提示存在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的其它潛在致病要素。在1983年Stina Syrjanen教授發(fā)現(xiàn)人類(lèi)乳頭狀瘤病毒（Human papillomavirus,

2、 HPV）感染與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病存在明顯的相關(guān)性，隨后在口咽及下咽等部位的鱗癌組織中相繼檢測(cè)出HPV，因此對(duì)HPV的研究受到越來(lái)越多的關(guān)注。當(dāng)今研究主要圍繞HPV感染與口咽癌的發(fā)病展開(kāi)，但多集中在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，缺乏針對(duì)中國(guó)人的研究報(bào)道，而且鮮見(jiàn)HPV與口腔癌的研究。2016年最新第八版修訂的美國(guó)癌癥分期聯(lián)合委員會(huì)（American Joint Committee Cancer, AJCC）癌癥分期手冊(cè)和2016年美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)

3、絡(luò)（NationalComprehensive Cancer Network, NCCN）頭頸部腫瘤臨床實(shí)踐指南均指出P16蛋白的表達(dá)是檢測(cè)HPV感染及評(píng)估預(yù)后的理想指標(biāo)。因此本課題對(duì)188例罹患口咽癌或口腔癌的中國(guó)患者的病理標(biāo)本進(jìn)行P16蛋白檢測(cè)，針對(duì)P16蛋白的不同表達(dá)情況與臨床病理學(xué)指標(biāo)及預(yù)后轉(zhuǎn)歸的關(guān)系進(jìn)行了回顧性研究并構(gòu)建預(yù)測(cè)模型（Nomogram,諾謨圖）。隨后通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)回顧性研究結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，充實(shí)了中國(guó)地區(qū)關(guān)于HPV與口

4、咽癌和口腔癌相關(guān)性的研究資料。
　　目的：
　　1.檢測(cè)P16蛋白在口咽癌和口腔癌中的表達(dá)，探討P16蛋白不同表達(dá)情況與口咽癌和口腔癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系并分析其臨床意義。
　　2.術(shù)后隨訪(fǎng)并構(gòu)建預(yù)測(cè)模型（Nomogram，諾謨圖）探討影響口咽癌和口腔癌患者術(shù)后總體生存率（Overall Survival, OS）及無(wú)瘤生存率（Disease-free Survival, DFS）的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并進(jìn)一步探討P

5、16蛋白陽(yáng)性的口咽癌和口腔癌患者術(shù)后對(duì)放化療的敏感性差異。
　　3.培養(yǎng)HPV陽(yáng)性SCC090細(xì)胞系和HPV陰性Fadu細(xì)胞系，在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期行6Gyγ射線(xiàn)照射，驗(yàn)證回顧性研究中患者對(duì)放療敏感性差異的結(jié)論。
　　方法：
　　1.收集93例口咽癌和95例口腔癌患者臨床病理學(xué)資料及標(biāo)本。
　　2.對(duì)188例鱗癌標(biāo)本進(jìn)行P16蛋白免疫組織化學(xué)染色（Immunohistochemistry, IHC）。2名病理科專(zhuān)家閱片并

6、確定陽(yáng)性表達(dá)組。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P16蛋白不同表達(dá)情況與口咽癌和口腔癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系并闡述其臨床意義。
　　3.通過(guò)電話(huà)、寫(xiě)信、患者門(mén)診復(fù)查記錄以及科室的定期隨訪(fǎng)記錄等方式收集口咽癌和口腔癌患者術(shù)后詳細(xì)隨訪(fǎng)資料。
　　4.以O(shè)S和DFS為指標(biāo)進(jìn)行單因素和多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型生存分析，確定影響口咽癌和口腔癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素并繪制生存曲線(xiàn)。
　　5.基于生存分析確定的獨(dú)立危險(xiǎn)因素構(gòu)建預(yù)測(cè)模型（Nomogr

7、am，諾謨圖），用于個(gè)體化預(yù)測(cè)口咽癌和口腔癌患者預(yù)后。
　　6. CCK8實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HPV陽(yáng)性SCC090和HPV陰性Fadu口咽鱗癌細(xì)胞系接受6Gy單劑量γ射線(xiàn)照射后細(xì)胞活力及凋亡情況。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：?2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier法、Log-rank檢驗(yàn)、多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型；Nomogram.
　　結(jié)果：
　　1.口咽癌中P16蛋白陽(yáng)性率為25.8%（24/93）。與P16蛋白陰性組

8、相比，患者的年齡、吸煙、病理學(xué)分化、N分期以及TNM臨床分期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？谇话┲蠵16蛋白陽(yáng)性率為9.5%（9/95）。與P16陰性組相比，吸煙，N分期和TNM臨床分期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.口咽癌患者單因素生存分析得出T分期、病理學(xué)分級(jí)、P16蛋白表達(dá)和術(shù)后治療方案（單純手術(shù)、手術(shù)＋單純放療和手術(shù)+同期放化療）影響口咽癌的OS。其中，P16蛋白陽(yáng)性組OS明顯高于P16陰性組，Log-rank

9、檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析提示T分期、P16蛋白的表達(dá)和術(shù)后治療方案是影響口咽癌OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外，單因素分析得出T分期、TNM臨床分期和P16蛋白表達(dá)影響口咽癌患者的DFS。其中，P16蛋白陽(yáng)性組DFS高于P16陰性組，Log-rank檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.022）。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析得出P16蛋白表達(dá)是影響口咽癌DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　3.口腔癌患者單因素生存分

10、析得出年齡、吸煙、T分期和TNM臨床分期影響口腔癌患者OS。其中，P16蛋白陰性組OS高于P16蛋白陽(yáng)性組，Log-rank檢驗(yàn)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.343）。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析提示吸煙是影響口腔癌OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外，單因素分析得出年齡、吸煙、T分期和P16蛋白表達(dá)影響口腔癌的術(shù)后DFS，P16蛋白陰性組術(shù)后DFS高于P16蛋白陽(yáng)性組，Log-rank檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.042）。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型生存

11、分析得出年齡、吸煙和P16蛋白表達(dá)是影響口腔癌DFS的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　4.口咽癌術(shù)后單純放療和同期放化療組中P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者OS明顯高于P16蛋白陰性表達(dá)的患者，表現(xiàn)出較高的放化療敏感性，Log-rank檢驗(yàn)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？谇话┬g(shù)后單純放療和同期放化療組中P16蛋白陰性表達(dá)的患者OS略高于P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者，Log-rank檢驗(yàn)均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.口咽部HPV陽(yáng)性SCC090細(xì)胞系和HPV陰性

12、Fadu細(xì)胞系接受單劑量γ射線(xiàn)6Gy，培養(yǎng)24h、48h和72h后，CCK8實(shí)驗(yàn)顯示，SCC090細(xì)胞活力明顯低于Fadu且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。流式細(xì)胞術(shù)顯示放療后24h，SCC090細(xì)胞系凋亡率為16.3%， Fadu細(xì)胞系凋亡率為7.1%，提示SCC090細(xì)胞系對(duì)放療更加敏感，與回顧性研究相符。
　　結(jié)論：
　　HPV感染是口咽癌和口腔癌的重要致病因素，P16蛋白可以作為檢測(cè)HPV感染的理想替代物。P16

13、蛋白在口咽癌中的陽(yáng)性率明顯高于口腔癌，與現(xiàn)有研究結(jié)果相一致。口咽癌患者中P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后和術(shù)后放化療效果均明顯優(yōu)于P16蛋白陰性表達(dá)者，且在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中同樣證實(shí)P16蛋白陽(yáng)性SCC090細(xì)胞系比P16蛋白陰性Fadu細(xì)胞系對(duì)放療更敏感，因此P16蛋白表達(dá)可以作為口咽癌患者預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)?；谏娣治龃_定的獨(dú)立危險(xiǎn)因素所構(gòu)建的預(yù)測(cè)模型（Nomogram，諾謨圖），可用于個(gè)體化預(yù)測(cè)口咽癌和口腔癌患者預(yù)后，將來(lái)可以通過(guò)多中心協(xié)作、加