TNF-α對(duì)脂聯(lián)素多聚化修飾及分泌調(diào)控的研究.pdf

1、脂聯(lián)素是哺乳動(dòng)物循環(huán)系統(tǒng)中含量最豐富的一種脂肪細(xì)胞因子。除了調(diào)節(jié)機(jī)體能量平衡外，脂聯(lián)素還具有增強(qiáng)胰島素敏感性，抵抗動(dòng)脈粥樣硬化和抵抗炎癥的作用。脂聯(lián)素過表達(dá)可降低血糖和改善胰島素抵抗。相反，脂聯(lián)素基因敲除可導(dǎo)致胰島素抵抗和葡萄糖不耐受。肥胖個(gè)體血液中脂聯(lián)素水平呈顯著下降。
　　脂聯(lián)素在循環(huán)系統(tǒng)中主要以三種復(fù)合體的形式存在:三聚體(LMW)，六聚體(MMW)，和含有18-36個(gè)脂聯(lián)素單體的高聚體(HMW)形式，HMW在總脂聯(lián)素中的含

2、量決定胰島素的增敏能力。脂聯(lián)素的多聚化依賴于分子間二硫鍵的形成，而蛋白質(zhì)二硫鍵的形成發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶ERO1-Lα，DsbA-L和ERp44在脂聯(lián)素多聚體尤其是高聚體的組裝和分泌過程中發(fā)揮重要的作用。
　　作為一種內(nèi)分泌器官，脂肪組織可分泌大量的細(xì)胞因子，如TNF-α，leptin，IL-6，和visfatin等。肥胖個(gè)體中巨噬細(xì)胞向脂肪組織的浸潤(rùn)可促進(jìn)脂肪組織炎癥環(huán)境的形成。TNF-α主要由成熟的脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞

3、分泌，在糖脂代謝中發(fā)揮重要作用，是炎癥導(dǎo)致的胰島素抵抗過程中的一個(gè)重要的細(xì)胞因子。
　　臨床研究證實(shí)，盡管脂聯(lián)素和TNF-α作為一種典型的脂肪組織分泌因子，但在肥胖和糖尿病患者的循環(huán)系統(tǒng)中，兩者的水平則呈顯著負(fù)相關(guān)。這是否因?yàn)門NF-α通過旁分泌或自分泌的方式直接調(diào)控脂聯(lián)素的多聚化和分泌，已成為該領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)。本文通過離體細(xì)胞、高脂飲食和重組TNF-α處理的活體模型，系統(tǒng)的研究了TNF-α對(duì)脂聯(lián)素多聚化和分泌調(diào)控的分子機(jī)制，旨在

4、回答脂聯(lián)素和TNF-α同屬脂肪組織分泌因子，但在肥胖患者循環(huán)系統(tǒng)中為何呈現(xiàn)顯著的消漲關(guān)系。研究結(jié)果如下:
　　1.通過高脂飲食和腹腔注射TNF-α的方法建立了胰島素抵抗表型的小鼠模型，通過對(duì)小鼠模型各生理指標(biāo)的檢測(cè)和比較發(fā)現(xiàn):高脂飼喂和TNF-α注射小鼠血糖和血漿胰島素含量均顯著升高;胰島素抵抗指數(shù)分析表明，兩組小鼠都表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗;與對(duì)照組相比，高脂飲食和腹腔注射TNF-α小鼠循環(huán)系統(tǒng)中脂聯(lián)素的分泌量顯著下降，HMW/總

5、脂聯(lián)素的比值也顯著下降。
　　2.TNF-α處理分化的3T3-L1脂肪細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素分泌顯著下降，HMW/總脂聯(lián)素的比值也顯著下降;Real-time和Western blot分析表明，TNF-α處理顯著的抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶ERO1-Lα和DsbA-L的表達(dá)。
　　3.PPARγ激動(dòng)劑、抑制劑處理及PPARγ敲減實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PPARγ可促進(jìn)ERO1-Lα和DsbA-L的轉(zhuǎn)錄。在克隆ERO1-Lα和DsbA-L的啟動(dòng)子序列的基

6、礎(chǔ)上，生物信息預(yù)測(cè)及雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，PPARγ可增強(qiáng)ERO1-Lα和DsbA-L的啟動(dòng)子活性;染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PPARγ可特異地與ERO1-Lα和DsbA-L啟動(dòng)子區(qū)-1685/-1533bp和-939/-815bp處的PPRE元件結(jié)合，調(diào)控ERO1-Lα和DsbA-L基因的表達(dá)，TNF-α處理顯著抑制PPARγ與相應(yīng)PPRE元件結(jié)合。
　　4.TNF-α可抑制ERp44的轉(zhuǎn)錄，超表達(dá)PPARγ不能挽救這