骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)及脂多糖對其增殖與分泌TNF-α的影響.pdf

1、目的：探討體外獲取高純度大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)的方法，并觀察脂多糖(LPS)對其增殖及分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響。
　　 方法：應用全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)大鼠BMSCs，進行傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，臺盼藍拒染法檢測細胞活力，并采用計數(shù)法測定其生長曲線，流式細胞術檢測細胞周期，免疫細胞化學法鑒定細胞表面標志CD34、CD44及CD45的表達。將BMSCs分為對照組及不同濃度LPS干預組(0μ

2、g/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)，采用噻唑藍(MTT)比色法觀察其增殖情況，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定TNF-α的分泌情況。
　　 結果：獲取的大鼠BMSCs形態(tài)呈均一成纖維細胞樣，并呈集落樣生長，細胞活力可達95％以上。細胞生長曲線顯示：在傳代后的第4～5天細胞開始明顯增殖，進入指數(shù)增生期，6天后進入平臺期。細胞周期結果顯示，81.49％P3代細胞為G0/G

3、1期，符合干細胞的特征。經(jīng)免疫細胞化學染色結果顯示：CD44表達陽性，CD34、CD45表達陰性，符合間充質干細胞(MSCs)的表型特征。MTT檢測結果顯示，與對照組(0.190±0.037)相比，0.01μg/ml、0.1μg/ml及1μg/mlLPS干預組OD值均增高，其中0.01μg/mlLPS干預組(0.253±0.030)增高明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而10μg/ml、100μg/mlLPS干預組OD值則較對照組

4、下降，其中10μg/mlLPS干預組(0.159±0.042)明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。ELISA檢測結果顯示，與對照組(30.373±0.633)相比，各濃度LPS干預組TNF-α濃度均有不同程度增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中，0.01μg/mlLPS干預組TNF-α濃度最高，與1μg/ml、10μg/mlLPS干預組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，與0.1μg/ml LPS干預組相比差異無統(tǒng)計學

5、意義(P＞0.05)。
　　 結論：應用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)出的大鼠BMSCs增殖能力強，具有MSCs的細胞表型特征，且此法簡單易行、適于推廣應用，所培養(yǎng)的細胞可用于進一步研究。LPS對BMSCs的增殖及分泌TNF-α均有影響，其與LPS濃度的關系表現(xiàn)為一定濃度的LPS作用可以促進BMSCs的增殖及分泌TNF-α，但隨著LPS濃度的增大，BMSCs的增殖能力及分泌TNF-α均下降。為進一步研究LPS對BMSCs的影響提供了科學的