西格列汀對阿托伐他汀攝取量的影響及其改變OATP1B1表達的研究.pdf

1、目的：證實阿托伐他汀可以通過 OATP1B1進行轉(zhuǎn)運，探討西格列汀(SIG)對阿托伐他汀(ATV)在293T細胞內(nèi)藥物蓄積的影響，明確2個藥物聯(lián)合應用后是否可以影響彼此在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運，為二藥在臨床的聯(lián)合應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：構(gòu)建OATP1B1真核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染HEK293T細胞后用G418篩選，建立OATP1B1過表達293T細胞，用免疫印跡確認細胞OATP1B1表達水平，并標記為293T1B1；
　　建立有效的液相

2、色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（LC-MS/MS）定量分析細胞內(nèi)阿托伐他汀的方法；
　　將西格列汀和阿托伐他汀單獨或者聯(lián)合給予293T1B1細胞后，處理不同時間點，取細胞并獲得細胞裂解液，萃取后采用 LC-MS/MS定量分析細胞內(nèi)阿托伐他汀濃度，并與未轉(zhuǎn)染的HEK293T為對照，考察阿托伐他汀的細胞內(nèi)蓄積濃度，以及考察西格列汀對阿托伐他汀細胞內(nèi)蓄積水平的影響。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了OATP1B1真核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染293T細胞以后48小時

3、可以檢測到 OATP1B1表達，利用 G418進行壓力篩選后獲得能穩(wěn)定高表達OATP1B1的293T細胞；
　　在高濃度時，阿托伐他汀對293T細胞有一定的抑制作用，西格列汀沒有抑制作用。而在較低濃度下，兩藥都對細胞增殖無顯著影響；
　　成功建立了針對細胞裂解中阿托伐他汀的LC-MS/MS定量分析方法，該方法快速、穩(wěn)定、定量限低，適用于阿托伐他汀測定的實際工作；
　　隨著孵育時間的延長，阿托伐他汀單藥在細胞內(nèi)的濃度隨時

4、間增加而增加。2藥合用組中，隨著西格列汀的加入的濃度增加，阿托伐他汀在293T1b1細胞中的蓄積進一步增加。差異具有統(tǒng)計學意義；
　　免疫印跡實驗的結(jié)果顯示西格列汀可一定程度上調(diào)OATP1B1的表達水平。
　　結(jié)論：阿托伐他汀在肝細胞的轉(zhuǎn)運水平與OATP1B1有關(guān)，當加入西格列汀后，可在一定程度上增加阿托伐他汀的轉(zhuǎn)運。而且西格列汀影響阿托伐他汀在肝細胞轉(zhuǎn)運的機制可能與西格列汀上調(diào)OATP1B1有關(guān)，西格列汀和阿托伐他汀具有潛