ASIC3在緩激肽B1受體激活引起炎性皮損區(qū)瘙癢反應(yīng)中的作用研究.pdf

1、瘙癢是皮膚疾病和一些系統(tǒng)疾病的常見臨床癥狀之一，嚴(yán)重影響睡眠，降低患者生活質(zhì)量。急性瘙癢主要由某些致癢物質(zhì)引起的，慢性瘙癢主要由皮膚疾病和某些系統(tǒng)性疾病引起。臨床上治療瘙癢以傳統(tǒng)的抗組胺治療為主，但對(duì)于大多數(shù)的慢性瘙癢，效果往往不佳。瘙癢的發(fā)病機(jī)制至今不是很清楚，目前普遍認(rèn)為瘙癢并不是由單一因素引起的，而是由致癢物質(zhì)、皮膚神經(jīng)纖維、角質(zhì)形成細(xì)胞、皮膚屏障、外周中樞神經(jīng)系統(tǒng)間的復(fù)雜相互作用的結(jié)果。
　　常用的完全弗氏佐劑(compl

2、ete Freund'S adjuvant，CFA)炎癥模型進(jìn)行觸誘發(fā)癢實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，炎癥皮損區(qū)出現(xiàn)癢覺敏化，并且緩激肽受體(bradykinin receptor，BR)在其中起到關(guān)鍵作用。緩激肽(bradykinin，BK)是目前已知的最強(qiáng)的致痛物質(zhì)也是重要的致炎因子。緩激肽及其代謝產(chǎn)物des Arg(9)-bradykinin，des-Arg(10)-kallidin通過結(jié)合細(xì)胞膜上的特異性緩激肽受體發(fā)揮生物作用。緩激肽受體是一種九肽

3、段蛋白耦聯(lián)受體(G.protein.coupled receptor，GPCR)受體。正常生理情況下B1R除中樞神經(jīng)系統(tǒng)組少量表達(dá)外其他組織幾乎不表達(dá)，而在細(xì)菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、炎癥、創(chuàng)傷等情況誘導(dǎo)下迅速表達(dá)，是一種誘導(dǎo)性表達(dá)受體。皮內(nèi)注射B1R受體激動(dòng)劑可引起CFA炎癥模型小鼠產(chǎn)生搔抓行為，但B1R受體激動(dòng)劑引起瘙癢的下游機(jī)制至今不是很清楚。有研究指出機(jī)體炎癥，對(duì)應(yīng)的背根神經(jīng)節(jié)(dorsal ro

4、ot ganglion，DRG)酸敏感性離子通道(Acid-sensing ion channels，ASICs)表達(dá)上升，干皮癥小鼠ASIC3基因敲除或使用特異阻斷劑均可使搔抓行為減弱。B1R激動(dòng)劑引起瘙癢是否與背根神經(jīng)節(jié)上ASIC3表達(dá)增加有關(guān)值得進(jìn)一步深入探討。
　　方法:
　　模型制備:C57BL/6J鼠七氟醚麻醉后頸背部皮膚剃毛，皮內(nèi)注射CFA，96h后進(jìn)行行為學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)前置于Plexiglas盒內(nèi)適應(yīng)30min

5、，麻醉后腹腔預(yù)注射ASIC3阻斷劑APETx2，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，腹腔注射后立即放入Plexiglas盒內(nèi)。30min后，于七氟醚麻醉后頸背部炎性皮損區(qū)皮內(nèi)注射B1R激動(dòng)劑，放入Plexiglas盒內(nèi)觀察小鼠后肢搔抓藥物注射部位的次數(shù)，每只小鼠的觀察時(shí)間為30min。觀察結(jié)束后處死取相應(yīng)節(jié)段DRG，western blot檢測DRG中ASIC3表達(dá)情況。
　　為進(jìn)一步探討ASIC3參與瘙癢是否具有選擇性，本研究檢驗(yàn)了APET

6、x2是否能抑制DCP模型小鼠自發(fā)癢以及急性致癢物質(zhì):氯喹(chloroquine，CQ)，內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）、48/80混合物(48/80compound)誘發(fā)的瘙癢。
　　結(jié)果:
　　1.抑制ASIC3通路顯著減弱小鼠B1R激動(dòng)劑誘發(fā)的炎性皮損區(qū)瘙癢行為。
　　較對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組腹腔預(yù)注射APETx2明顯減弱小鼠的搔抓行為(Fig1-1，*P＜0.05)，表明ASIC3參與B1R激動(dòng)劑誘發(fā)

7、的瘙癢。
　　2.抑制ASIC3通路只能減弱某些致癢物質(zhì)引起的瘙癢。
　　腹腔預(yù)注射APETx2明顯減弱氯喹引起的瘙癢（Fig2-2，*P＜0.05），但對(duì)48/80compound，ET-1引起的搔抓行為無明顯減弱作用（Fig2-2，*P＞0.05）.
　　3.抑制ASI3通路減弱DCP自發(fā)癢模型小鼠的搔抓行為。
　　實(shí)驗(yàn)組腹腔注射APETx2小鼠30min內(nèi)搔抓次數(shù)顯著較對(duì)照組減少(Fig2-1，*P＜0.0