利用DNA拓撲結(jié)構(gòu)探針研究DNA損傷信號轉(zhuǎn)導.pdf

1、本研究采用由大連理工大學化學生物學課題組設計、合成的8H-H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈衍生物1a(3-(4-甲基哌嗪)-8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈)和3a(3-(3-N,N'-二甲氨基-丙氨基)-8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈)為研究工具，研究了不同程度的DNA構(gòu)象改變在DNA損傷信號轉(zhuǎn)導中的作用。 在確定了1a和3a與DNA的結(jié)合模式的基礎上，證明它們嵌入DNA雙螺旋后，對于DNA雙螺旋

2、具有不同程度的解旋作用。通過免疫細胞熒光染色，研究細胞內(nèi)的Ataxia-telangiectasia mutated(ATM)蛋白激酶能夠響應1a和3a的脅迫，證明了一種新的能夠被細胞信號轉(zhuǎn)導通路蛋白ATM監(jiān)測到的DNA損傷形式，同時確定了1a和3a是一對新的可以用來研究DNA損傷信號轉(zhuǎn)導通路的DNA拓撲結(jié)構(gòu)探針。 利用1a和3a具有不同程度解旋DNA的特性，研究了ATM、RNAPII、p53等蛋白在DNA損傷信號轉(zhuǎn)導中的作用

3、、協(xié)同機制和影響因素。1a觸發(fā)的ATM磷酸化強于3a，因此得出結(jié)論：ATM的激活程度與DNA解旋程度相關(guān)。另外，結(jié)合流式細胞術(shù)、免疫細胞染色、ChIP、定量PCR(Q-PCR)和Westem blot，研究了培養(yǎng)細胞在1a和3a的脅迫下，p53的積累及磷酸化，RNAPII的超磷酸化和次磷酸化，以及RNAPII在轉(zhuǎn)錄基因上分布動力學，發(fā)現(xiàn)1a可以誘導轉(zhuǎn)錄阻滯，最終引發(fā)依賴p53的凋亡，而3a則不可以。以上的研究顯示，轉(zhuǎn)錄阻滯和DNA解旋的