利用DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)探針研究DNA損傷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo).pdf

1、本研究采用由大連理工大學(xué)化學(xué)生物學(xué)課題組設(shè)計(jì)、合成的8H-H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈衍生物1a(3-(4-甲基哌嗪)-8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈)和3a(3-(3-N,N'-二甲氨基-丙氨基)-8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈)為研究工具，研究了不同程度的DNA構(gòu)象改變?cè)贒NA損傷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用。 在確定了1a和3a與DNA的結(jié)合模式的基礎(chǔ)上，證明它們嵌入DNA雙螺旋后，對(duì)于DNA雙螺旋

2、具有不同程度的解旋作用。通過(guò)免疫細(xì)胞熒光染色，研究細(xì)胞內(nèi)的Ataxia-telangiectasia mutated(ATM)蛋白激酶能夠響應(yīng)1a和3a的脅迫，證明了一種新的能夠被細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白ATM監(jiān)測(cè)到的DNA損傷形式，同時(shí)確定了1a和3a是一對(duì)新的可以用來(lái)研究DNA損傷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)探針。 利用1a和3a具有不同程度解旋DNA的特性，研究了ATM、RNAPII、p53等蛋白在DNA損傷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用

3、、協(xié)同機(jī)制和影響因素。1a觸發(fā)的ATM磷酸化強(qiáng)于3a，因此得出結(jié)論：ATM的激活程度與DNA解旋程度相關(guān)。另外，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)、免疫細(xì)胞染色、ChIP、定量PCR(Q-PCR)和Westem blot，研究了培養(yǎng)細(xì)胞在1a和3a的脅迫下，p53的積累及磷酸化，RNAPII的超磷酸化和次磷酸化，以及RNAPII在轉(zhuǎn)錄基因上分布動(dòng)力學(xué)，發(fā)現(xiàn)1a可以誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄阻滯，最終引發(fā)依賴(lài)p53的凋亡，而3a則不可以。以上的研究顯示，轉(zhuǎn)錄阻滯和DNA解旋的