解脂耶氏酵母親環(huán)蛋白基因的克隆及其打靶載體的構(gòu)建.pdf

1、親環(huán)蛋白(cyclophilin，CyP)家族是一類廣泛存在于原核和真核生物體內(nèi)，并在結(jié)構(gòu)上高度保守的多功能蛋白質(zhì)。該家族屬于具有催化含脯氨酸的寡肽底物順反異構(gòu)作用的肽脯氨酰順反異構(gòu)酶(peptidyl-prolylcis-transisomerases，PPIase)。CyP通過催化含肽脯氨酰的順反異構(gòu)而幫助蛋白質(zhì)折疊和組裝。此外，CyP還起著分子伴侶的作用，在應(yīng)激反應(yīng)中參與調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并影響RNA的剪接過程。自最初CyP作為免

2、疫抑制劑環(huán)孢素A(cyclosporinA，CsA)的細(xì)胞受體被發(fā)現(xiàn)以來，目前大約有130種CyP同源異構(gòu)體被發(fā)現(xiàn)和克隆。CyP家族各成員間不僅分子量不同，而且在細(xì)胞分布及功能上也存在著差異。解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)是研究最廣泛的非常規(guī)酵母之一。它能以含脂肪或蛋白質(zhì)的物質(zhì)作為碳源生產(chǎn)甲烷。在有氧的情況下，它能利用烷烴類化合物、油脂、葡萄糖等生產(chǎn)檸檬酸。因此，解脂耶氏酵母菌株很容易從奶制品或香腸中分離，也很容易

3、從油田中分離。解脂耶氏酵母對(duì)人沒有致病力。 研究表明，在解脂耶氏酵母中含有13個(gè)CyP基因，它們分布于不同染色體上，本文選取其中1個(gè)CyP基因(GenBank登錄號(hào)：YA130C15653p)為研究對(duì)象。生物信息學(xué)分析表明該cya含638個(gè)氨基酸，分子量約為71Kda，pI值為5.59，可能存在于細(xì)胞質(zhì)中。該蛋白含2個(gè)功能結(jié)構(gòu)域(WD40和cyclophilin)，雖然與人類CyPA相似度僅為44.8％，但決定CyP結(jié)構(gòu)和功能的